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蛋白表达基础知识
我们提供一系列易于使用的蛋白表达系统和工具，其设计为多种下游应用提供高蛋白产量，助力您快速获得研究结果。通过我们的选择工具和教学视频，帮助创建基因、纯化质粒并选择合适的蛋白表达产品。
蛋白表达流程
为蛋白表达及生产选择一个宿主系统
在选择用于表达蛋白的宿主系统时，有许多需要考虑的因素。其中包括：翻译后修饰、设备可用性和时间限制。我们已为每个宿主系统的详细信息以及我们提供的恰当产品的信息建立了映射，您可以根据您的需求和预算做出理想选择。
| 您是否需要修饰？ | 您需要多久获得蛋白？ | 您具备了支持表达试验的哪些能力（实验室设备及资源）？ | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 无 | 一些 | 全部 | 数天 | 数周 | 数月 | 无 | 一些 | 许多 | |
| 哺乳动物 |  | | | ||||||
| 细菌 |  | | | ||||||
| 酵母 |  | | | ||||||
| 昆虫 |  | | | ||||||
设备
- 有哪些设备可供使用？
蛋白类型
- 您的蛋白是否在细菌或酵母细胞中内源性表达？
- 您是否知道，其在细菌表达系统中不可溶解？
- 您需要天然翻译后修饰吗？
- 您是否需要一定程度的真核细胞翻译后修饰？
所需的准备时间
- 一周之内（细菌，瞬时哺乳动物细胞）
- 一月之内（除了细菌和瞬时哺乳动物细胞外，还可以使用酵母和昆虫系统）
- 超过一个月（除了上述系统之外，您还可以使用稳定的哺乳动物系统）
哺乳动物表达
| 载体选择 | 克隆 | 转化大肠杆菌 | 质粒纯化 | 转染 | 表达 | 纯化 | 分析 |
由启动子和终止子决定 | 根据载体选择而定 - 或者 - | 推荐 DH5α™ TOP10 菌株 | 可以是大量、巨量或宏量 | 取决于速度 | 基于所选表达系统的培养基：293 或 FreeStyle™ | 基于标签或原生成分的亲和性 | 分析与测定 |
细菌表达
| 载体选择 | 克隆 | 转化大肠杆菌 | 质粒纯化 | 转化 | 克隆优化 | 规模化 & 纯化 | 分析 |
任何含 T7 启动子的载体 | - 或者 - | 推荐 TOP10 菌株，但可从亚克隆产品中进行选择 | 微型制备试剂盒 | 转化入任意表达菌株 | TB 或 LB | TB、LB 或 MagicMedia™ & 树脂纯化 | 分析与测定 |
酵母表达
| 载体选择 | 克隆 | 转化入大肠杆菌 | 质粒纯化 | 转入酵母 | 克隆选择 | 表达 | 纯化 | 分析 |
蛋白质是否具有分泌信号 是？使用 PichiaPink™ | 采用限制性酶进行克隆 | One Shot® TOP10 Electrocomp™ 大肠杆菌 | 酵母菌株 | Zeocin™ | 培养基 | 带有非必要分泌物 & 标签亲和物 | 分析与测定 |
昆虫表达
| 载体选择 | 克隆 | 转化入大肠杆菌 | 质粒纯化 | 转入细菌 | 纯化杆粒 | 转染 | 扩增/表达 | 分析 |
选择 TOPO® 或 Gateway® 载体 | 选择克隆所用的 TOPO® 或 Gateway® | 推荐 DH5α™ TOP10 菌株，但可从亚克隆产品中进行选择 | 微型制备试剂盒 | 转化入 DH10Bac | 中量或大量制备，具体取决于产量要求 | 使用 Cellfectin® II 进行转染 | SF9 & SF21 | 分析与测定 |
操作视频
“近距离接触发明者”系列
通过 GeneArt® 表达优化基因可将蛋白表达效率提升达 100 倍。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。