Stimulated Emission Depletion Microscopy (STED)

STED顕微鏡は2種類のレーザーパルスを用い、 各焦点スポットで蛍光の位置情報を得ます。第一のパルスは蛍光物質を励起して蛍光状態にするために使用され、第二のパルスは励起焦点スポット周辺の蛍光物質を脱励起するために使用される変形ビームです。サンプル上の焦点スポットをくまなくラスタースキャンして画像を構築するため、広い視野の場には合画像の取得スピードは比較的遅くなります。この手法の大きなメリットは、高解像度でイメージングできる被写界深度(最大で10~15 µmの深度)が深いことです。

適切な色素を使用すれば、x軸およびy軸方向の分解能は30 nmを達成でき、z軸方向の分解能は従来の共焦点顕微鏡と同等です。STEDで最大のパフォーマンスを達成するためには、装置のシステムで使用される励起および抑制ビームの波長に合った性質を持つ蛍光色素が必要です。非常に多くの論文で、STED顕微鏡と共にMolecular Probes®の色素が用いられています。

蛍光タンパク質による生細胞標識

STEDは主として有機蛍光色素を用いて行われますが、生細胞のイメージングには蛍光タンパク質、特にGFPを使用できます。Molecular Probes® CellLight®試薬はready-to-useの蛍光タンパク質コンストラクト(GFPまたはtagRFP)であり、特定の細胞下構造をターゲットとしています。これらの試薬は、生存細胞中の対象の細胞内小器官の標識をシンプルかつ効果的に行います。生細胞または固定後の細胞において、CellLight®試薬を用い、ミトコンドリア、リソソーム、膜、細胞骨格、および核といった特定のオルガネラを可視化することができます。CellLight®試薬は、生細胞において様々な蛍光色素とのマルチプレックス解析が可能なほか、固定した後に免疫蛍光法によるイメージングも可能です。

抗体コンジュゲートおよび標識

Molecular Probes®の蛍光色素は、STEDアプリケーションにおいて、固定細胞アプリケーション用には抗体コンジュゲートとして、また固定細胞および生細胞用にはタンパク質、デキストラン、または他の生体分子とのコンジュゲートとして、十分に試験されています。下記のSTED製品選択ガイドをご利用になり、お使いのアプリケーションに最適な波長およびSTEDレートを持つ蛍光色素をお選びください。各色素の引用文献リストもございます。このアプリケーションでは複数のAlexa Fluor®プローブが非常に優れた性能を発揮し、各チャンネルでマルチプレックス解析を可能にしています。選択ガイドの製品リンクをたどると、目的の分子をターゲットするにあたり、現在利用可能な各蛍光色素のバイオコンジュゲート全てを見ることができます。リストは、抗体およびファロイジンから成長因子およびレクチンにまでおよびます。お探しのコンジュゲートがリストにない場合は、ご自分でバイオコンジュゲート プローブを作成するための反応性色素または最適な標識キットをリンク先でご紹介しています。

CellTrace™ Calcein Green AM色素

CellTrace™ Calcein Green AM色素は細胞透過性の色素であり、真核細胞において細胞生存率の測定によく用いられます。無蛍光のCellTrace™ Calcein Green AM色素は、生細胞内に取り込まれ、細胞内エステラーゼによりアセトキシメチル(AM)エステルを除去されることにより、緑色蛍光のカルセインになります。

STED製品選択ガイド
 GFP
ターゲット発現タンパク質
STED波長(nm)575
文献引用文献
レーザー(nm)488
標準フィルターセットFITC
Ex/Em (nm)488/510
 製品検索
 Alexa Fluor® 488Oregon Green®Pacific Orange®Alexa Fluor® 594
ターゲット標識標識標識標識
文献引用文献引用文献引用文献引用文献
レーザー(nm)488488405594
標準フィルターセットFITCFITCTRITCTexas Red® 色素
Ex/Em (nm)495/519501/526400/551590/617
 製品検索製品検索製品検索製品検索
 CellTrace™ Calcein Green
ターゲットオルガネラ - 細胞質
文献引用文献
レーザー(nm)488
標準フィルターセットFITC
Ex/Em (nm)494/516
カタログ番号C34852
 GFP
ターゲット発現タンパク質
STED波長(nm)575
文献引用文献
レーザー(nm)488
標準フィルターセットFITC
Ex/Em (nm)488/510
 製品検索
 Alexa Fluor® 488Oregon Green®Pacific Orange®Alexa Fluor® 594
ターゲット標識標識標識標識
文献引用文献引用文献引用文献引用文献
レーザー(nm)488488405594
標準フィルターセットFITCFITCTRITCTexas Red® 色素
Ex/Em (nm)495/519501/526400/551590/617
 製品検索製品検索製品検索製品検索
 CellTrace™ Calcein Green
ターゲットオルガネラ - 細胞質
文献引用文献
レーザー(nm)488
標準フィルターセットFITC
Ex/Em (nm)494/516
カタログ番号C34852

研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。