特殊用途のFBS：特殊アプリケーション用ウシ胎仔血清

Gibco MaxSpec FBSはサーモフィッシャーサイエンティフィックの最高品質のFBSで、当社最高の試験レベルと品質仕様を提供します。

• エンドトキシンおよびヘモグロビンの濃度がもっとも低い、もっとも特性評価されたGibco血清
• エンドトキシン濃度：≤1 EU/mL
• ヘモグロビン濃度：≤15 mg/dL
• 最大76項目の品質規格試験が収載されたUSP／EPガイドラインに準拠
• 他のGibco FBSよりもBSEリスクがもっとも低く、ウイルスのリスクを低減

Ultra low IgG FBSはクロマトグラフィーによりIgGが除去されています。このことは、既存濃度のIgGにより生物の分離が阻害される可能性がある場合や、定量的IgGイムノアッセイの際に重要な要素です。IgGが除去されても、血清は完全な生物活性を維持します。

エキソソーム除去FBSはエキソソームフリーFBSとも呼ばれる超高純度FBSで、エキソソームが高度に（90%以上）除去されていますが、細胞培養性能を維持します。この特殊用途のFBSは、エキソソーム分離アッセイや、miRNAなどのエキソソーム内容物が関与する研究に使用されています。エキソソーム除去FBSを選択することで、血清の超遠心分離という非効率性を排除できます。

図1.エキソソーム除去FBS中のラットオリゴデンドロサイト細胞の増殖速度。ラットオリゴデンドロサイト細胞を96ウェルプレートにウェルあたり1,000細胞で播種し、次のいずれかのサプリメントを容積で2%または10%含有する培地で増殖させました：Gibcoエキソソーム除去FBS、Gibco FBS（エキソソーム除去バージョンのソース）、または超遠心分離済みFBS。72時間の培養後、生細胞をInvitrogen Hoechst 33342で染色し、プレートを96ウェルプレートイメージング機器（Trophos Plate RUNNER HD）でイメージングおよび解析しました。結果は、96ウェルプレート解析により報告された総細胞数として示されています。(結果は、スウェーデンUmeå University薬理・臨床神経科学部のJonathan Gilthorpe博士の研究室から得たものです。）

図2.エキソソーム除去済みFBS中で増殖させた細胞の生存率と生存細胞密度複数の細胞株を、10%のエキソソーム除去FBSまたは10%の処理前のFBSを含有する基礎培地（DMEM、高グルコース、GlutaMAX Supplement）で増殖させ、生細胞密度（VCD）と細胞生存率をVi-CELL機器解析によりアッセイしました。結果は、エキソソーム除去FBSで得られた生存率または生細胞密度を、処理前のFBS（エキソソーム除去FBSの作成に使用）で得られたそれらに対するパーセンテージとして示されています。

図3.FBSのエキソソーム除去法の比較。3つの異なるロットのFBSを、3種類のエキソソーム除去法で処理しました。1つ目の方法では、110,000 X gで3時間超遠心分離しました（超遠心分離1として標識）。2つ目の方法では、150,000 X gで18時間超遠心分離しました（超遠心分離2として標識）。3つ目の方法は当社独自のプロセスを用いて、FBSからエキソソームを除去しました（エキソソーム除去FBSとして標識）。ソースFBSはエキソソーム除去プロセスの前のFBSを指します。エキソソームを除去後、Total Exosome Isolation Reagent (from serum)を使用して除去済み血清からエキソソームを抽出し、分離したエキソソームを親油性色素で染色することにより、残存エキソソームの相対レベルを測定しました。蛍光シグナルは相対蛍光単位（RFU）として示されています。データは、当社独自の方法を使用したエキソソーム除去効率が超遠心分離と比較して向上していることを示しています。

図4.FBSエキソソーム除去の検証。FBSサンプルからのエキソソーム除去をNanoSight機器（エキソソーム除去の前後で30～150 nmのカウントを比較）および蛍光ベースアッセイの分析により検証しました。簡潔に説明すると、このアッセイではTotal Exosome Isolation Reagentを使用してエキソソームを血清から抽出し、分離したエキソソームをInvitrogen BODIPY TR Ceramideで染色します。除去率は、エキソソーム除去FBSの蛍光シグナルをソースFBSと比較することにで得られます。示されている最初の2つのエキソソーム除去ロットは、当社独自の製造方法で製造されたものです。同じ分析に、超遠心分離してエキソソームを除去したFBSサンプルと、競合他社のエキソソーム除去FBS製品を含めています。

図5.エキソソーム除去FBSのウェスタンブロット分析（A）SDS-PAGEによるFBSの分析：同量（10 µg）のFBSタンパク質をSDS-PAGEで分析しました。エキソソーム除去FBSは、その製造で使用されるソースFBSと非常に似ています。（B）ウェスタンブロット分析によるCD63含有量：エキソソームをFBSサンプルから沈殿させSDS-PAGEを行い、CD63をウェスタンブロッティングで分析しました。エキソソーム除去FBSはテストした他のすべてのFBSサンプルと比較して、CD63を検出せず、優れたエキソソーム除去を示唆しています。MW = 分子量マーカー。

図6. FBSサンプル由来エキソソームのmiRNA検出。FBSサンプルからエキソソームを分離し、（Total Exosome RNA & Protein Isolation Kitを使用して）エキソソームからトータルRNAを分離しました。その後、Applied Biosystems TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kitを使用して、qRT-PCRによりRNAをLet7e、miR16、miR21、miR23a、miR24、およびmiR122に対して分析しました。

MSC用FBSは、間葉系幹細胞（MSC）の増殖と、（コロニー形成ユニット-線維芽細胞アッセイによる）クローン計数をサポートするように特別に試験されています。MSC用FBSは、MSC研究に最適なFBSを特定するために複数のFBSロットを検査する必要性を排除するために、入念に設計されています。

図7.MSCクローン効率に対するFBSソースの影響。 Gibco FBSの結果（試験した2つのロットを赤色と青色のバーで表示）を、競合他社のFBS製品の結果（黄色のバー）とともに示しています。Student’s t-testにおいてp<0.05。

図8.MSC増殖に対するFBSソースの影響。 Gibco FBSの結果（試験した2つのロットを赤色と青色のバーで表示）を、競合他社のFBS製品の結果（黄色のバー）とともに示しています。Student’s t-testにおいてp<0.05。

業界をリードする適格性アッセイを使用して製造されたES細胞用FBSは、胚幹細胞（ES細胞）の高い播種効率を達成し、多能性を維持するように特別に設計されています。ES細胞は胚盤胞の内細胞塊に由来し、生物学的機能に関するさまざまな研究に利用されています。ES細胞を培養する際、発現やその他の特性をテストするためにES細胞が目的の細胞型に分化する能力を維持していることが重要です。そのため、ES細胞用FBSはES細胞の適切な増殖条件の維持に役立ちます。

図10.mESCコロニーの位相コントラストおよび蛍光画像。ES細胞用FBSを添加した培地で培養したmESCは、屈折端が明瞭で、小さな細胞からなる緊密なコロニーを形成し、分化した細胞がほとんどないなどの形態学的特性を示しています。これらの細胞は、Alkaline Phosphatase (AP) Live Stainによって多能性が示され、Oct4およびSox2を発現しています。

図11. ES細胞用FBSを添加した培地で増殖させたmESCは正常な核型を示しています。PRX129/X1 mESC株の正常な核型のレポート。試験した20個の細胞のうち18個は正常な核型を示しました（Cell Line Genetics）。

図12. ES細胞用FBSを添加した培地で培養したmESCはLIF反応性を維持します。LIFをmESC培地から除去すると、正常なmESC培養物は反応して様々に分化します。LIFありおよびなしで増殖させたPRX129/X1マウスES細胞はこの反応を示します。