TOPO®での5分間の高効率クローニング

TOPO® TA in vitrotranscription kit は、in vitro RNA転写およびシーケンシング用のT7およびSP6プロモーターを持つpCR®II-TOPO® TAベクターを利用します。TOPO® TAテクノロジーはTaqを用いて増幅したPCR産物を5分のベンチトップ反応で直接ライゲーションするため、組換え効率は最大95%となります。

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pCR®II-TOPO® TAベクターの特徴：

  • Taqを用いて増幅したPCR産物を直接ライゲーションするための3´-Tオーバーハング
  • in vitro RNA転写およびシーケンシング向けのT7およびSP6プロモーターがあり、ベクターにはシーケンシングのためのM13フォワードおよびリバースプライマー領域も含まれます。
  • インサート配列を簡単に切り出すための、PCR産物インサートに隣接のEcoRIサイト
  • E. coliでの選別用にアンピシリン、カナマイシン耐性遺伝子が選択可能
  • 組換体のセレクションに使用するための簡単な青/白コロニースクリーニング

pCR®II-TOPO® TAベクターマップ

pCR®II-TOPO® TAベクター

TOPO TAクローニングの性能と価値

各TOPO® TA Cloning® in vitro Transcription Kitには、直鎖状およびトポイソメラーゼI-活性化pCR™II-TOPOベクター、塩類溶液、dNTP、コントロールテンプレートとプライマー、M13フォワードおよびリバースプライマー、One Shot®ケミカルコンピテントまたはElectrocomp™ E. coli、S.O.C.培地、スーパーコイル型のコントロールプラスミドが含まれます。

プルーフリーディング酵素をお使いですか？

Platinum® Pfxなど、幅広い3´～5´エキソヌクレアーゼ活性がある熱安定性ポリメラーゼには3´ Aオーバーハングがありません。Taqポリメラーゼで生成したPCR産物はTOPO® TAサブクローニングキットでクローニングを高い効率で行いますが、それは3´ Aオーバーハングが削られていないためです。ただし、プルーフリーディングポリメラーゼを使用する場合や平滑末端断片をクローニングしたい場合、PCR反応の最後にTaqとインキュベートすることで3´ Aオーバーハングを付加できます。

または、Zero Blunt® TOPO® PCRクローニングキットを試したい場合もあるかもしれません。これらのキットでは、熱安定性の高いプルーフリーディングポリメラーゼを使って生成した平滑末端PCR産物を迅速に効率よくクローニングすることができます。ccdB遺伝子をポジティブセレクションとして利用することも可能です。

注文のご案内

カタログ番号製品詳細添付されるコンピテントセル反応数 
452640TOPO® TA Cloning® Kit, Dual promotor for in vitro Transcriptionーなし10ご注文はこちら
K4600J10TOPO® TA Cloning® Kit, Dual promotor for in vitro TranscriptionTOP10（ジェノタイプ）10ご注文はこちら
K460001
TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® TOP10 Chemically Competent E. coli TOP10 (genotype)25ご注文はこちら
K462001
TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® MAX Efficiency™ DH5α T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli
MAX Efficiency™ DH5α™ T1R (genotype)25ご注文はこちら
K465001
TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® TOP10F' Chemically Competent E. coli
TOP10F' (genotype)25ご注文はこちら
K466001TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® TOP10 Electrocomp™ E. coli Electrocompetent TOP10 (genotype)25ご注文はこちら
K461020
TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli
Mach1™ T1R (genotype)25ご注文はこちら
K460040
TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® TOP10 Chemically Competent E. coli
TOP10 (genotype)50ご注文はこちら
K462040 TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® MAX Efficiency™ DH5α T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli
MAX Efficiency™ DH5α™ T1R (genotype)50ご注文はこちら
K465040 TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® TOP10F' Chemically Competent E. coli
TOP10F' (genotype)50ご注文はこちら
K466040TOPO® TA Cloning® Kit for in vitro Transcription, with One Shot® TOP10 Electrocomp™ E. coli
Electrocompetent TOP10 (genotype)50ご注文はこちら

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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.