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PCR増幅DNA断片(平滑またはAオーバーハング)を40以上の選択肢があるサブクローニング、シーケンシング、発現ベクターにたった5分で直接クローニングします。それにより、最高95%の組換えクローンが得られます。
図1 TOPO®クローニングプロトコル。TOPO® PCRクローニングに必要なのは、3つの簡単なステップだけです。PCR生成物とTOPO®クローニングベクターを混合し、5分後、E. coliを形質転換します。
ステップ | TOPO® TAクローニングキット | TA/UAクローニング | 制限酵素またはカットバックを用いたクローニング |
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既存プライマーが使用できますか? | Yes | Yes | No |
クローニングするためのベクターは準備されていますか? | Yes | Yes | No |
ライゲーション試薬は含まれていますか? | Yes | Yes | No |
コンピテントセルを別に準備または購入する必要がありますか? | No、同梱されています。 | 購入:0時間 準備:最大6時間 | 購入:0時間 準備:最大6時間 |
ライゲーション時間 | 5分 | 1時間 | 2~23時間 |
組換え効率 | 95%まで | 60~80% | ~60% |
クローニングに必要な時間 | 5分 | 1~12時間 | 2~23時間 |
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.