凍結細胞の融解

融解操作は凍結細胞にストレスを与えます。よって、適切な技術を使用し迅速に作業することで融解後の高い細胞生存率が保養されます。  他の細胞培養操作と同様に、最善の結果を得るためには細胞および他の試薬に付属の製品説明書に厳密に従うことをお勧めします。

• 凍結細胞は 37 °C のウォーターバスで迅速に（1 分以内）に融解してください。
• あらかじめ温めておいた増殖培地を用いて融解細胞をゆっくりと希釈します。
• 細胞の回復を最適化するために、融解した細胞を高濃度で播種します。
• 常に適切な無菌操作を実施し、層流フード内で作業してください。
• フェースマスク、ゴーグルなどの個人用防護具を必ず着用してください。  液相で保管したクライオバイアルは、融解時に破裂する危険があります。
• 凍結培地には組織への有機分子の侵入を促進することが知られているDMSO が含まれいます。DMSO を含む試薬は機器を使用して取り扱ってください。

• 凍結細胞を含むクライオバイアル
• 37 °C にあらかじめ温めておいた完全増殖培地
• 滅菌済みの使い捨ての遠心分離チューブ
• 37 °C のウォーターバス
• 70％エタノール
• 組織培養処理済みフラスコ、プレートまたは培養皿

以下のプロトコルは、凍結保存された細胞を融解するための一般的な手順を説明しています。  詳細なプロトコルについては、常に細胞固有の製品添付文書をご参照ください。

1. 凍結細胞が入ったクライオバイアルを液体窒素から取り出し、直ちに 37 °C のウォーターバスに移してください。
2. バイアル中に氷が少し残るまで37 °C のウォーターバス中でバイアルをゆっくり回して、細胞を速やかに融解します（1 分以内）。
3. バイアルを層流フードに移します。  開封する前に、バイアルの外側を 70％エタノールで拭き取ります。
4. 細胞株に適した量のあらかじめ温めておいた完全増殖培地を融解細胞が入った遠心分離チューブ に滴下します。
5. 細胞懸濁液を約 200 x g で 5 ～ 10 分間遠心分離します。  実際の遠心分離の速度と時間は、細胞の種類によって異なります。
6. 遠心分離後、上清が透明であるか、また完全なペレットが目視できるかをチェックします。細胞ペレットを攪乱することなく上清を無菌的にデカントします。
7. 細胞を完全増殖培地に静かに再懸濁させ、適切な培養容器に移し、推奨培養環境に置きます。