蛋白类药物的完整分子量

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完整分子量测定是蛋白质药物产品（如单抗）研发与质控中最常进行的分析项目，而ESI-Orbitrap MS（电喷雾离子化-静电场轨道阱质谱）已经成为最常用的测量方法之一。包括完整分子量及还原分子量测定，切N糖后分子量测定，轻重链分子量测定，抗体-化学药物偶联物（ADC）分子量及DAR（Drug to Antibody）值分析等。在ESI（电喷雾离子化）条件下，蛋白分子将携带多电荷，以单抗为例，其将携带40-70 个左右的电荷，信号落入2500-3500m/z 范围内。在此质荷比区域内，Orbitrap分辨率可达几万，因此可从容进行此项分析。

对于ADC药物而言，根据单抗的氨基酸序列理论分子质量进行计算，将观察到的质谱峰进行归属后，可计算该ADC单抗分子结合的药物小分子分子量，同时根据质谱峰的峰强度信息，还可以计算得到该药物的DAR值，该数值对于ADC 药物的有效性评估至关重要。

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在药物开发和生产的所有阶段都必须进行生物制药表征。在药物开发过程中，液相色谱 - 质谱（LC-MS）用于通过细胞系产生的单克隆抗体（mAbs）的结构表征。其主要目标是测定产生期望mAb的单克隆细胞群，且对特定抗原具有高精确度和活性。在整个生产过程中，需要持续分析完整生物制剂，以评估批次放行所要求的纯度和异质性特征。

可以采用多种分析方法评估完整生物治疗分子。可通过简单脱盐后进行 MS 分析获取蛋白质的精确质量数和异质性信息，该信息对于定量各种糖型和进行蛋白质异构体分析来说非常重要，治疗药物在制剂和储存时也需着重考虑。还原和酶解后，可以在它们的亚基水平上分析生物治疗药物。对治疗性抗体亚基的分析有助于进行重链和轻链的精确分子量分析，通过进一步的自上而下分析进行序列确认。

在非变性或非变性条件下进行蛋白质分析降低了电荷数，从而导致在更高分辨率和更高 m/z 范围内进行mAb检测。例如，非变性质谱条件还允许保留半胱氨酸连接的抗体 - 药物偶联物（ADC）分析可能必需的关键非共价键结构。