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溶酶体标记物
溶酶体是膜结合细胞器，参与多个细胞过程，如生物分子降解、细胞凋亡、细胞信号传导、细胞代谢和质膜修复。溶酶体标记物可用来高效识别和示踪溶酶体。LysoTracker 标记物靶向酸性内含物并定位于溶酶体，而 CellLight 荧光融合蛋白则靶向溶酶体膜以定位和示踪溶酶体。
溶酶体简介
溶酶体是膜结合细胞器，含有降解生物分子的酶，可降解碳水化合物、脂类、核酸和多肽等等 [1–3]。细胞内分子的消化过程称为自噬，而内吞作用吸收的细胞外物质的消化过程称为吞噬作用 [1, 2]。溶酶体还通过吞噬作用参与病毒颗粒或细菌的消化。经研究，溶酶体还参与其他细胞过程，包括胞内胞外物质的细胞内运输、增殖和生长以及细胞代谢的调节 [3]。
溶酶体标记物选择指南
LysoTracker 溶酶体标记物
LysoTracker 是细胞渗透性溶酶体标记物，靶向并示踪活细胞中的酸性细胞器。LysoTracker 标记物由与弱碱性胺结合的荧光基团组成。虽然 LysoTracker 的滞留机制尚未完全明确，但很可能是由于细胞器膜内的质子作用。溶酶体标记物在低 pH 的细胞器中积累，在中性 pH 下仅部分质子化。LysoTracker 系列溶酶体标记物有多种颜色，可与其他荧光标记物共用、进行多色标记 （图 1 和 2）。
图 1.溶酶体和线粒体的多色成像。牛肺动脉内皮细胞 (BPAEC) 与 50 nM LysoTracker Red DND-99 和 75 nM MitoTracker Green FM 在 37°C 下共孵育 30 分钟。即使细胞在 3% 戊二醛中固定 30 分钟后，两种染料都表现出良好的细胞滞留能力。使用惠更斯软件对图像进行去卷积。
图 2.溶酶体和内吞作用的多色成像。使用 Hoechst 33342和 50 nM LysoTracker Deep Red在完全培养基中标记 A549 细胞 15 分钟。然后使用预热后的 DPBS 清洗细胞，并在 37°C 下，在含有 40 µg/mL pHrodo Green Dextran 10,000 偶联物的 DPBS 中培养 90 分钟。最后使用标准 DAPI/FITC/Cy5 滤光片组合进行成像。图像伪色设置为 Hoechst 33342（蓝色），LysoTracker Deep Red （红色）和 pHrodo Green Dextran 10,000 偶联物（绿色）。
CellLight 溶酶体融合蛋白
CellLight 荧光融合蛋白表达在溶酶体膜上，在活细胞中标记溶酶体，以示踪溶酶体在细胞内的行为动态。CellLight 荧光蛋白由Lamp1（溶酶体相关膜蛋白 1）与 emGFP (图 3) 或 TagRFP (图 4)融合构成 。CellLight 溶酶体膜标志物有绿色或红色荧光融合蛋白可选，可与其他荧光染料和蛋白共用、进行多色标记。此外，荧光在固定和透化后仍会保留。
在自噬溶酶体降解之前，溶酶体膜标志物也可以作为与自噬体融合过程的示踪工具。
图 3.使用 CellLight 溶酶体-GFP 进行活细胞成像。使用 200 µM 叔丁基过氧化氢处理表达 CellLight 溶酶体-GFP 的人骨肉瘤 (U2-OS) 细胞，处理时间两个小时。在 37°C 下使用含有 5 µM CellROX Orange 和 2 滴/ml NucBlue 活细胞染色剂的染色液处理细胞 30 分钟。清洗细胞，并使用活细胞成像液成像。
图 4.使用 CellLight 荧光融合蛋白进行活细胞成像。表达CellLight Lysosomes-RFP和CellLight MAP4-GFP的人主动脉平滑肌细胞 (HASMC) 进行 Hoechst 33342染色。使用 DeltaVision Core 显微镜和标准 DAPI/FITC/TRITC 滤光片组合进行活细胞成像。
参考文献
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。