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逆转录产生RNA的互补DNA (cDNA) ,而cDNA可作为RNA研究中一系列下游应用的模板。因此,发现并避免cDNA合成过程中的潜在问题,对于保证实验结果的有效性至关重要。本页面提供的疑难解答提示适用于绝大多数常见的逆转录应用,尤其是(定量)逆转录PCR或RT-(q)PCR。
可能的原因 | 建议 |
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RNA完整性低 | |
RNA纯度低 | |
GC含量高及/或二级结构 |
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低RNA量 | |
不理想的逆转录酶 | |
逆转录未达到理想时间和温度 |
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不正确的引物设计 |
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反应组分的质量(或稳定性) |
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可能的原因 | 建议 |
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基因组DNA (gDNA)污染 |
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有问题的引物设计 |
可能的原因 | 建议 |
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RNA完整性低 | |
存在逆转录酶抑制剂 | |
高GC含量及/或二级结构 |
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有问题的引物 |
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不理想的逆转录酶 |
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可能的原因 | 建议 |
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RNA丰度低 |
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RNA完整性低 |
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RNA纯度低 | |
高GC含量及/或二级结构 |
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引物有问题 |
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逆转录未达到理想时间和温度 |
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不理想的逆转录酶 |
可能的原因 | 建议 |
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不理想的逆转录酶 |
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基因组DNA污染 (gDNA) |
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更多疑难解答提示,请访问我们的逆转录和RACE支持中心、cDNA文库及其构建以及高通量测序支持中心,或者联系我们的技术支持团队。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。