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无菌技术
成功的细胞培养在很大程度上取决于维持细胞不受细菌、真菌和病毒等微生物污染。非无菌用品、培养基和试剂、带有微生物的空气悬浮微粒、不洁净的培养箱和脏污的工作台面都是生物污染的来源。
无菌技术的作用是在环境微生物和无菌的细胞培养之间提供一道屏障，它通过一套操作流程来降低上述来源的污染概率。无菌技术的要素是无菌工作区、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌处理。
视频：无菌技术
防止细胞培养污染的步骤和最佳实践无菌技术的演示。
无菌工作区
减少空气悬浮微粒和气溶胶（例如灰尘、孢子、脱落皮肤、打喷嚏）污染的最简单经济的方法是使用细胞培养通风橱。
- 应正确设置细胞培养通风橱，并将其放置在一个仅限于细胞培养的区域，该区域没有来自门、窗和其他设备的气流，并且区域内不可穿行。
- 工作台面应保持整洁，只包含特定程序所需的物品；不应将其用作存储区域。
- 使用前和使用后，应对工作台面进行彻底消毒，并定期清洁周围区域和设备。
- 日常清洁时，在工作前和工作期间，特别是在发生任何泼溅后，应使用70%乙醇擦拭工作台面。
- 您可以使用紫外线对细胞培养通风橱中的空气和暴露工作台面进行灭菌。
- 在细胞培养通风橱中，不需要也不建议使用酒精灯。
- 让细胞培养通风橱始终保持运行，只有在长时间不使用时才将其关闭。
良好的个人卫生
在处理细胞培养物前后，清洗双手。
穿戴个人防护设备除了可以保护您免受有害物质的伤害外，还可降低脱落皮肤以及衣物上的灰尘和污垢造成污染的可能性。
无菌试剂和培养基
商品化试剂和培养基均经过严格的质量控制以保证其无菌，但它们在操作过程中可能被污染。遵循以下无菌处理指南，以避免污染。始终使用适当的灭菌程序（例如高压灭菌、无菌过滤）对实验室中制备的任何试剂、培养基或溶液进行灭菌。
无菌处理
- 始终用 70% 乙醇擦拭双手和工作区。
- 在将容器、培养瓶、培养板和培养皿放入细胞培养通风橱中之前，使用 70% 乙醇擦拭其外表面。
- 避免直接从瓶或培养瓶中倾倒培养基和试剂。
- 使用无菌玻璃或一次性塑料移液管和移液器处理液体，每个移液器仅使用一次以避免交叉污染。无菌移液管到使用时才能打开其包装。将移液器放在工作区。
- 试剂瓶和培养瓶使用后应盖上盖子，多孔板应用胶带密封或放入可重复密封的袋中，以防止微生物和悬浮污染物进入。
- 在您准备好使用无菌培养瓶、瓶子、皮氏培养皿等之前，切勿打开，切勿将其暴露在环境中。使用完后，尽快盖回。
- 如果取下盖子，且必须将其放在工作台面上，请将盖子开口朝下放置。
- 只能使用无菌玻璃器皿和其他设备。
- 进行无菌操作时，注意不要说话、唱歌或吹口哨。
- 尽快进行实验，以尽可能减少污染。