介绍

“NeuroELISA”试剂盒是夹心ELISA（酶联免疫吸附试验）试剂盒。这些试剂盒是专为快速、准确且灵敏定量 β-淀粉样蛋白、tau 和 α-突触核蛋白而设计，且经过专门验证。这些即用型神经生物学ELISA试剂盒能够测量各种生物样品中的蛋白质，包括血清、血浆和CSF（脑脊液）。有关更多详情，请访问我们的神经生物学ELISA页面。

快速链接

我们提供各种Thermo Scientific Pierce和Novex神经生物学ELISA试剂盒。这些试剂盒有助于确保获得绝佳的检测结果和重现性。这些试剂盒符合灵敏度、动态范围、精密度、特异性、回收率和批次间一致性等质量控制规范。请参见ELISA选择工具部分，找到满足您的研究需求的试剂盒。

ELISA方法是抗原定量的一个标准。ELISA适用于高通量筛选，因为获得结果快速、一致且相对容易分析。使用高度纯化、预先匹配的捕获抗体和检测抗体的夹心方式获得最佳实验结果。产生的信号可提供非常灵敏且具有高度特异性的数据。

神经特异性ELISA方案（图1）始于包被在微孔板孔上的靶蛋白特异性捕获抗体。将样品（包括含有目标蛋白的标准品、对照样品和未知物）移至孔中。在第一次培养期间，蛋白抗原与捕获抗体结合。洗涤后，向孔中加入检测抗体，该抗体与第一次孵育过程中捕获的固定蛋白结合。除去多余的检测抗体后，加入酶联（即辣根过氧化物酶）二抗并与检测抗体结合。在第三次孵育和洗涤以除去多余二抗后，加入底物溶液，并通过酶反应成可检测的形式（颜色信号）。该有色产物的强度与原始标本中抗原的浓度成正比。Thermo Scientific Pierce和Novex神经生物学ELISA试剂盒旨在进行磷酸化特异性检测，具有很高的特异性，并与蛋白免疫印迹数据密切关联。

图 1.典型神经生物学方案我们的即用型神经生物学ELISA试剂盒配有标准品、检测抗体、辣根过氧化物酶偶联物、显色底物和终止溶液，可完成上述所有步骤。

注释：所提供的方案是多数用于测量神经蛋白的神经生物学即用型ELISA试剂盒的代表性方案。各个试剂盒的方案可能有所不同。本通用方案可能需要根据目标蛋白、抗体、缓冲液或使用的底物进行优化。有关更多详情，请参见ELISA概述和ELISA开发和优化部分。


材料

典型神经生物学ELISA试剂盒组成部分

  • 抗体包被的96孔微孔板；
  • 检测抗体（有时生物素化）；
  • 标准品
  • HRP偶联物（抗体或链霉亲和素）；
  • 稀释缓冲液；
  • 洗涤缓冲液；
  • 显色底物（即TMB）；
  • 终止溶液；
  • 孔板盖；

试验要求的其他材料


方案示例

运行时间：4小时— 30分钟手动操作时间。
注释：每次定量分析都必须制作标准曲线。

  1. 使用前，让所有试剂平衡至室温。使用前，轻轻混合所有液体试剂。
  2. 向孔中加入100µL制备好的标准品和样品。

    注释：在细胞提取缓冲液中制备的样品必须使用稀释缓冲液按1:5或更高比例稀释。所选择的稀释度应针对每个实验系统进行优化。

  3. 向孔中加入100µL稀释的检测抗体。轻轻敲击孔板的侧面进行混合。盖上孔板，在室温下孵育2小时。
  4. 从孔中彻底吸出或倾倒溶液并丢弃液体。
  5. 使用洗瓶或96孔洗板机清洗孔4次。

    注释：无论您采用何种洗涤方法，(洗瓶或自动洗板机）向孔中注入至少400 µL经稀释的洗涤缓冲液。浸泡15到30秒，然后倒出液体。重复。所有后续洗涤步骤均采用此方法。

  6. 向每个孔中加入100µL经稀释的HRP偶联物。盖上孔板，在室温下培养30分钟。
  7. 从孔中彻底吸出或倾倒溶液并丢弃液体。
  8. 洗涤4次。
  9. 向每个孔中加入100µL显色底物。
  10. 在室温下在黑暗中显影30分钟。
  11. 向每个孔中加入100µL终止溶液。孔中的溶液应该从蓝色变成黄色。
  12. 读取每个孔在450nm处的吸光度。必须在反应停止后30分钟内对孔板进行测量。
  13. 使用曲线拟合统计软件绘制四参数曲线，然后计算未知样品的结果。

注释：如果使用抗体对试剂盒来构建自己的ELISA，您需要自行将捕获抗体包被在96孔微孔板上。该过程将需要：一个96孔微孔板、捕获抗体和封闭缓冲液（通常是BSA或稀释在PBS中的牛奶）。在开始上述方案之前，请遵循以下步骤：

  1. 使用前，让所有试剂平衡至室温。使用前，轻轻混合所有液体试剂。
  2. 向每个孔中加入100µL经稀释的捕获抗体。盖上孔板，在4℃下过夜培养。
  3. 将孔板平衡至室温。从孔中彻底吸出或倾倒溶液并丢弃液体。
  4. 洗涤4次。
  5. 向每个孔中加入200µL封闭缓冲液。盖上孔板，在室温下孵育1小时。
  6. 从孔中彻底吸出或倾倒溶液并丢弃液体。

--继续上述方案--

实验结果

Thermo Scientific Pierce和Novex神经生物学ELISA试剂盒经过高级测试和验证。以下是通过我们最常卖试剂盒获得的数据。有关我们选择神经生物学ELISA试剂盒的更多详情，请访问我们的神经生物学ELISA页面。

 
   
图 2.人总Tau ELISA试剂盒使用上述方案对样品进行系列稀释并使用 Tau（总）人类ELISA 试剂盒。证明了天然和重组（标准）人tau蛋白之间的一致性。 图 3.小鼠淀粉样β蛋白42 ELISA试剂盒使用上述方案，将样品添加到标准品稀释缓冲液中，并使用淀粉样β42 ELISA试剂盒（小鼠）检测。证明了淀粉样β蛋白标准品和细胞培养上清液之间的一致性。所用的细胞培养上清液来自Neuro2a（小鼠神经母细胞瘤）细胞。

仅供科研使用，不可用于诊断目的。