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材料

  • 解剖显微镜或放大镜
  • 磷酸盐缓冲盐水
  • Q-Tip
  • 手术剪或手术刀
  • 两个10 mL注射器，附带一个旋塞阀和一个小号针头（25或27 ga） 

方案

  1. 大鼠应完全麻醉（例如，对脚趾挤压无反应）。

  2. 通过放血对大鼠实施安乐死。最简单的方法是切开腹主动脉。避免心脏穿刺，因为在灌注过程中穿刺点会渗漏。

  3. 打开胸腔，注意不要刺穿肺部。沿中线切开整个胸骨；用镊子提起胸骨，并保持剪刀尖水平，这将减少意外肺穿刺的机会。接下来，从中线切口开始，在胸壁两侧进行横切。侧向收缩胸壁一侧，钝性解剖胸膜与肺脱离，用Q-tip轻轻将肺推离胸壁，沿脊柱突垂直切开胸壁。胸壁的另一半重复上述步骤。注意不要让肋骨的锋利边缘刺穿肺部。

  4. 在上腔静脉和下腔静脉上放置血管夹或结扎线，以防止灌注缓冲液回流到全身静脉系统。其余步骤最好使用放大镜（解剖显微镜或眼睛放大镜）。

  5. 用手术刀或小剪刀在左心室上做一个切口，确保心室朝外。

  6. 准备一个装有PBS的10 ml注射器，连接一个旋塞阀和一个小号针头（25或27 ga）。准备第二个装有PBS的注射器，以备不时之需。将针头插入右心室，轻轻将PBS推入肺循环。这时你应该看到右心和肺动脉有一点膨胀，液体应该立即开始从左心室切口流出。继续推PBS，直到肺部变白，左心室流出的液体完全清澈—这通常需要10-15 ml缓冲液。小针头可以防止过快地推入缓冲液，而且与大针头相比，泄漏的问题更少。

  7. 另一个对灌注有效但需要更长时间的选择是给肺动脉插管。这可以通过将塑料导管穿过右心并进入肺动脉，然后结扎肺动脉将导管固定到位来实现。这种方法不需要夹住腔静脉。可以用注射器将缓冲液推入导管，注意不要在肺系统中产生过大的压力，或者通过不超过心脏水平约10cm的重力输入缓冲液。

BioSource   C-070276 1107      2007年1月1日