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“PhosphoELISA”试剂盒是磷酸化特异性夹心ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒,可以定量测量细胞内的蛋白质。磷酸化特异性ELISA试剂盒可以在信号研究中用于测量磷酸化、修饰、切割位点特异性和总蛋白。有关更多详情,请访问我们的磷酸化特异性ELISA页面。
我们提供各种Thermo Scientific Pierce和Novex磷酸化特异性试剂盒,包括STAT3、CREB、PRAS40、p38、AMPK alpha、PTK2和Caspase 3信号。 这些试剂盒均经过验证并且具有很高的质量和重现性。 这些试剂盒符合灵敏度、动态范围、精密度、特异性、回收率和批次间一致性等质量控制规范。请参见ELISA选择工具部分,找到满足您的研究需求的试剂盒。
ELISA方法是抗原定量的一个基准。ELISA适用于高通量筛选,因为其结果获得快速、一致且相对容易分析。利用高度纯化、预先匹配的捕获和检测抗体,通过夹心方式获得最佳结果。产生的信号可提供非常灵敏且具有高度特异性的数据。
磷酸化特异性方案(图1)始于包被在微孔板孔上的靶蛋白特异性捕获抗体。将样品(包括含有目标蛋白的标准品、对照样品和未知物)移至孔中。在第一次孵育期间,蛋白抗原与捕获抗体结合。洗涤后,向孔中加入检测抗体,该抗体与第一次培养过程中捕获的固定蛋白结合。除去多余的检测抗体后,加入酶联(即辣根过氧化物酶)二次抗体并与检测抗体结合。在第三次孵育和洗涤以除去多余二次级抗体后,加入底物溶液,并通过酶反应转化为可检测的形式(颜色信号)。该有色产物的强度与原始标本中抗原的浓度成正比。Thermo Scientific Pierce和Novex磷酸化特异性试剂盒旨在进行磷酸化特异性检测,具有很高的特异性,并与蛋白免疫印迹数据密切相关。
图 1.典型磷酸化特异性方案我们的即用型磷酸化特异性ELISA试剂盒配有标准品、检测抗体、辣根过氧化物酶偶联物、显色底物和终止液,可完成上述所有步骤。
注释:所提供的方案是多数磷酸化特异性即用型ELISA试剂盒的代表性方案。各个试剂盒的方案可能有所不同。本通用方案可能需要根据目标蛋白、抗体、缓冲液或使用的底物进行优化。有关更多详情,请参见ELISA概述和ELISA开发和优化部分。
运行时间:4小时— 30分钟手动操作时间。
注释:每次定量分析都必须添加标准曲线。
注释:如果使用抗体对试剂盒来构建自己的ELISA,您需要自行将捕获抗体包被在96孔微孔板上。该过程将需要:一个96孔微孔板、捕获抗体和封闭缓冲液(通常是BSA或稀释在PBS中的牛奶)。在开始上述方案之前,请遵循以下步骤:
Thermo Scientific Pierce和Novex磷酸化特异性ELISA试剂盒经过高级测试和验证。以下是通过我们最常卖试剂盒获得的数据。有关我们磷酸化特异性ELISA试剂盒系列产品的更多详情,请访问我们的磷酸化特异性ELISA试剂盒页面。
图 2.ERK 1/2 [pT185/pY187] 人磷酸化ELISA试剂盒使用上述方案,连续稀释样品,并使用ERK 1/2 [pT185/pY187] 人磷酸化ELISA试剂盒运行方案(货号:KHO0091)运行方案。证明了ERK 1/2标准拼和PMA处理的Jurkat(永生化的人T淋巴细胞)细胞裂解物之间的平行性。 | 图 3.PRAS40 [pT246] 人磷酸化-ELISA试剂盒使用上述方案,连续稀释样品,并使用PRAS40 [pT246] 磷酸化ELISA试剂盒(货号:KHO0421)运行方案。证明了PRAS40标准品和Jurkat(永生化人T淋巴细胞)细胞裂解物之间的平行性。 |
仅供科研使用,不可用于诊断目的。