大鼠肝脏制备

• 铝箔
• 液氮
• 干冰
• 5 mL 培养管
• 磷酸盐缓冲盐水
• 蛋白酶抑制剂片剂（Sigma货号：P-8340）
• Quant-iT™ 蛋白检测试剂盒（货号：Q33210）

  1.  无菌取出肝脏。
  2.   用液氮快速冷冻箔包中的肝脏。储存在–80℃温度下。
  3.   在干冰上压碎肝脏样品，并储存在预冷的5 ml培养管中。
  4.   向新的冷冻试管中加入约100 μg组织（足以几乎覆盖5 ml培养管的圆形部分）。
  5.   加入1 ml含10μl 蛋白酶抑制剂（Sigma货号：P-8340）的PBS。用湿冰冷却该溶液。
  6.   低速匀浆~20秒。确保保持低温，并将样品保存在湿冰上。
  7.   将样品转移到1.7 ml微量离心管中。
  8.   在4°C温度下以14000 x g 的速度离心15分钟。
  9.   取出并等分上清液。我们建议制作几份50 μl的等分样品。
10.  在运行ELISA试验之前，将蛋白稀释至1:100，并运行Bradford总蛋白检测或Quant-iT™ 蛋白定量试剂盒检测（货号：Q33210）。
11.   将样品稀释至同等浓度，然后按照ELISA试验方案中的说明运行ELISA试验。