本プロトコールは、固定・浸透処理した細胞において、F-アクチンを蛍光染色するための一般的注意事項を述べています。アクチンは、細胞中に最も豊富にみられるタンパク質の一種であり、モノマーが、F-アクチンと称されるある種の微小繊維を形成するときに、蛍光体で非常に簡単に染色することができます。F-アクチンに結合する分子であるファロイジンを蛍光色素でラベルすると、蛍光顕微鏡を使用して細胞を研究している細胞生物学者にとって非常に有用なツールになります。F-アクチンを染色すれば、細胞の全体の形状および構造を示しやすくなり、他の蛍光ラベルとの相互位置関係を示すことができます。

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プロトコール情報
蛍光ファロイジンを使用してアクチンを染色する場合、15分間の代わりに20分間透過処理すれば、より良好な結果が得られます。

必要なもの


F-アクチン色素—基本的な染色プロトコール

  • 固定・浸透処理した細胞が対象となります。
  • 蛍光免疫染色の前または後に使用可能です。
  • 本プロトコールに示した容量は、6ウェルプレートまたは単一の35 mmディッシュの単一ウェルに適しています。

1蛍光標識されたファロイジンをPBSに溶かしてF-アクチン染色溶液 1 mLを調製します。ファロイジンは、一般に非常に水溶性であり、100～200 nM濃度でF-アクチンを染色します。色素濃度の最適化をする場合、テストしたい各濃度の染色溶液を調製する必要があります。
2固定・浸透処理した細胞から、PBSを除去します。
3染色溶液 1 mLを添加します。
420分間室温でインキュベートします。
5色素溶液を除去します。
63回PBSで洗浄します。
7細胞を観察します。
8オプション：長期保存用サンプルを保存します。また、サンプルを固定剤中に固定することもできます。染色実験を始める前に、蛍光色素が使用したい固定剤と適合しているかどうかを確認するというのはよい考えです。

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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.