核の蛍光染色プロトコール

核染色—基本的ラべリングのプロトコール

このプロトコールに記述した容量は、６ウェルプレートの単一ウェル、または単一の35 mmディッシュに適しています。

使用する核染色色素には、製造業者が想定した使用濃度と反応時間が情報として、たいがい付いてくるものです。色素が乾燥ペレットまたはDMSO保存溶液として提供された場合、おそらく段階希釈をする、すなわち、まず保存溶液を作り、それを基により希釈した使用液を調製する必要があります。この使用液はさらに希釈されて染色液となります。ふー…何とまあ多くの希釈液でしょう！ほとんどの核色素に対して、手始めに1 mM使用液を作り、試料用として1 μM染色液に希釈するのがよいと思います。

染色培地としては、完全培地（すなわち、普段使用している細胞培養培地）、またはPBSまたはHBSSなどの生理食塩水をベースとした緩衝液を使用することが可能です。どれを選ぶかはあなたの実験設計によります。例えば、生細胞集団中の死細胞を標識する生存度アッセイを実施する場合、完全培地中での標識を選択するかも知れません。または蛍光免疫染色中に対比染色を実施する場合、生理食塩水をベースとした緩衝液中で標識することを選択するかも知れません。

色素濃度の最適化を行う場合、テストしたい各濃度の染色液を調製する必要があります。例えば、6ウェルプレート中の1つのウェルに対して十分量の染色液を望む場合、使用する各濃度の染色液 1 mLを作ってください。