CRISPR Nuclease mRNAによるマルチプレックスゲノム編集


GeneArt CRISPR Nuclease mRNAは、CRISPR/Cas9によるゲノム編集を行うための、すぐにトランスフェクション可能な野生型Cas9 mRNAです。選択したゲノム遺伝子座をターゲットとするガイドRNA（gRNA）とコトランスフェクションすると、gRNAによってCas9タンパク質が目的の遺伝子座に導かれ、二本鎖DNA を切断します。

CRISPR Nuclease mRNAシステムは、複数のgRNAを加えることにより、1回のトランスフェクション反応で複数のターゲット遺伝子配列を同時に編集するマルチプレックスゲノム編集が可能です。このシステムは汎用性が高く、使用方法も簡単です。ターゲットを変更する場合は、gRNAのデザインを変更するだけです。
 

GeneArt CRISPR Nuclease mRNA

ヒント：初めてCRISPR編集を行う場合は、ヌクレアーゼとしてTrueCut Cas9 Proteinsを使用することをお勧めします。タンパク質のプロセスはmRNAの翻訳を必要とせず、すぐに編集可能なCas9リボ核タンパク質複合体を導入することができます。

GeneArt CRISPR Nuclease mRNA注文情報
無料のTrueDesign Genome Editorを使用して、ゲノム編集実験のデザインや必要な試薬をご確認いただけます。

NOTE：CRISPR-Cas9ゲノム編集では、目的のターゲットシーケンスでゲノムDNAを切断するためのガイドRNA（gRNA）が必要です。詳細についてはCRISPR-Cas9用ガイドRNAおよびCRISPR Cas9スクリーニングライブラリ をご参照ください。

マルチプレックスゲノム編集およびトランスジェニックモデルシステム アプリケーションのためのCas9 mRNAワークフロー

GeneArt CRISPR Nuclease mRNAを使用すると、1つのウェルで最大4つの異なるgRNAを同時にトランスフェクションすることができ、複数の遺伝子の切断効率を同時に評価できます。このアプローチを用いることで、特定のターゲットに最適なgRNA配列の特定や、1回のトランスフェクションで複数のゲノム遺伝子座の編集を行うことができます。

さらに、Cas9 mRNAを用いたCRISPR-Cas9ゲノム編集は、マウス[1]、ゼブラフィッシュ[2]、ショウジョウバエなど、さまざまな生物におけるトランスジェニックモデルシステムの生成のためのマイクロインジェクションやその他のin vivo導入方法での使用が引用されています。マイクロインジェクション実験およびマウスモデルの生成では、少なくとも3つの合成sgRNAをテストし、選択した細胞株で検証することをお勧めします。
 

Flow chart illustrating the use of CRISPR mRNA for multiplexed gene editing along with a bar graph and gel image showing that cleavage efficiency for each target gene is consistent when using GeneArt CRISPR Nuclease mRNA and IVT gRNA to target only a single gene or multiple genes
Flow chart illustrating the use of CRISPR mRNA for multiplexed gene editing along with a bar graph and gel image showing that cleavage efficiency for each target gene is consistent when using GeneArt CRISPR Nuclease mRNA and IVT gRNA to target only a single gene or multiple genes

図1.GeneArt CRISPR Nuclease mRNAとIVT gRNAを使用した効率的な多重ゲノム編集HEK293（ヒト胚性腎臓）細胞に、GeneArt CRISPR Nuclease mRNAおよびin vitro転写（IVT）gRNAを用いて、ターゲット遺伝子HPRT、AAVS1、RelAのうち、1つのターゲット（赤）でトランスフェクションした場合、2つのターゲット（黄色）または3つのターゲット（緑）で同時に行なった場合のゲノム編集効率を示しています。IVT gRNAのみをトランスフェクションしたコントロール細胞（灰色）および GeneArt CRISPR Nuclease reporter plasmidをトランスフェクションした細胞（紫色）は、比較用に示しています。編集効率は、ターゲットの数にかかわらず、条件全体で一貫していました。
 

さまざまな宿主およびトランスジェニックモデルシステムにおけるCRISPR mRNAアプリケーション

データ：GeneArt CRISPR Nuclease mRNAがマウス神経細胞において高い編集効率を達成

当社のLipofectamineトランスフェクション試薬による完全なCas9 mRNAフォーマットは、幹細胞やトランスフェクション困難な細胞株においても優れた導入と高いゲノム編集効率を実現します。

Bar graph and gel image showing higher cleavage efficiency in cells transfected with Cas9 mRNA and IVT gRNA than cells transfected with the all-in-one CRISPR plasmid

図2.GeneArt CRISPR Nuclease mRNAシステムは、さまざまな宿主で高効率なゲノム編集が可能。このシステムをIVT gRNAと併用し、Mouse Neuro-2A細胞（マウス神経芽細胞）のROSA26およびNANOG遺伝子座で編集を実施しました。細胞はLipofectamine 2000 Reagentを使用して24ウェルフォーマットでトランスフェクションを行ない、トランスフェクション72時間後にGeneArt Genomic Cleavage Detection Kitを使用して解析しました。どちらの遺伝子においても、切断効率はオールインワンのCRISPRプラスミドより良好でした。
 

CRISPR mRNA注文情報

参考文献
  1. Wu Y, Liang D, Wang Y, et al.Correction of a genetic disease in mouse via use of CRISPR-Cas9.Cell Stem Cell.2013; 13: 659–662. 
  2. Shah AN, Davey CF, Whitebirch AC, Miller AC, Moens CB.Rapid reverse genetic screening using CRISPR in zebrafish.Nat Methods.2015; 12: 535­–540. 
  3. Hashimoto M, Takemoto T. Electroporation enables the efficient mRNA delivery into the mouse zygotes and facilitates CRISPR/Cas9-based genome editing.Sci Rep.2015; 5: 11315. 
     
Gene editing resources and support
Resources
Support

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.