Cas9ヌクレアーゼ

CRISPR Cas9ゲノム編集に適したCas9ヌクレアーゼのフォーマット

CRISPR-Cas9ゲノム編集の実験において、Cas9ヌクレアーゼはgRNAに結合し、特定のゲノム標的配列での二本鎖切断を誘導します。Cas9酵素が機能するには、こうした標的配列において、目的とする切断部位の近くにプロトスペーサー隣接モチーフ（PAM）サイトが存在している必要があります。Cas9ヌクレアーゼは、実験デザインやご希望のワークフローに合わせて複数のフォーマットを用意しており、正確なDNA切断と遺伝子ノックアウトを可能にします。

Cas9ヌクレアーゼ選択ガイド

	Cas9タンパク質	Cas9 mRNA	Cas9プラスミド	Cas9レンチウイルス
対象	ほとんどのCRISPR研究および前臨床アプリケーション			安定発現細胞株の作製
主な特長	転写と翻訳をバイパスオフターゲット効果を最小化 3つのフォーマットで利用可能：野生型TrueCut Cas9 Protein v2：もっとも一般的な研究用途 TrueCut HiFi Cas9 Protein：オフターゲット効果の影響を受けやすいアプリケーション用 CTS TrueCut Cas9 Protein：臨床研究アプリケーション用	既存のmRNAプロトコルに適合マイクロインジェクションに最適転写をバイパス複数gRNAとの同時トランスフェクトが可能	既存のプラスミドプロトコルに適合 GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kitを用いてオールインワンCas9およびgRNAベクターとして組み込み可能	アレイまたはプール型のgRNAライブラリに最適さまざまな細胞で安定したCas9発現を促進２つの核局在シグナルをもつヒトコドンに最適化されたCas9を含む
主な制限事項	なし	翻訳が必要	準備に手間と時間が必要オフターゲット効果を悪化させる可能性ありゲノムDNAに取り込まれる可能性あり転写と翻訳が必要	ウイルス形質導入に対する細胞応答の可能性あり
推奨の導入方法	Lipofectamine CRISPRMAX Transfection Reagent	Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent	Lipofectamine 3000 Transfection Reagent	レンチウイルスによる形質導入
推奨の導入方法	Neon Transfection System CTS Xenon Electroporation System（大容量エレクトロポレーション用）			レンチウイルスによる形質導入
詳細を見る	Cas9タンパク質オプション	Cas9 mRNAオプション	Cas9プラスミドオプション	Cas9レンチウイルスオプション

さまざまなCRISPR-Cas9ゲノム編集モダリティでの細胞処理

プラスミドやmRNAフォーマットとは対照的に、当社のTrueGuide合成gRNAと複合体を形成したTrueCut Cas9タンパク質のトランスフェクションでは、転写と翻訳をバイパスして、Cas9酵素を用いた実験における編集効率を大幅に向上させます。また、CRISPRプラスミドは細胞内に72時間以上留まるためオフターゲットの切断を悪化させる可能性があるのに対して、TrueCut Cas9タンパク質は24時間以内に細胞から除去されるため、オフターゲット効果は最小限に抑制されます。

Methods of nuclear entry and genome targeting for three different Cas9 nuclease formats

図1.CRISPR-Cas9ゲノム編集フォーマットの比較。Cas9とガイドRNAの細胞への導入は、DNA、RNA、またはあらかじめ形成されたリボ核タンパク質複合体（RNP）のフォーマットにて行われます。プラスミドDNAベクター（左上）を用いる場合、Cas9遺伝子はまず核で転写され、細胞質に輸送されて翻訳される必要があり、mRNA/gRNA混合物（下）では翻訳をする必要があります。当社のTrueCut Cas9タンパク質とTrueGuide synthetic gRNAを組み合わせた試薬とタンパク質の複合体（右上）は、これらの予備工程（すなわち転写と翻訳）を回避し、よりシンプルで効率的なゲノム編集を実現します。