ゲノム編集のためのオールインワンCRISPRプラスミドシステム

オールインワンCRISPR-Cas9ベクターの設計に使用する Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kitには、Cas9ヌクレアーゼカセットとターゲットガイドRNA（gRNA）クローニングカセットが両方含まれており、単一のCas9プラスミドを用いてお客様が選んだゲノム遺伝子座を編集することができます。

キットには、CRISPR-Cas9ベクターの設計、構築、増殖のためのツール、およびトランスフェクトされた集団のソーティングまたは濃縮を可能にするレポーターが含まれています。

GeneArt CRISPR Nuclease Kitを注文

Cas9ヌクレアーゼ、gRNA、レポーターを単一のCRISPR-Cas9ベクターに統合


GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kitは、Cas9エンドヌクレアーゼも発現するプラスミド ベクターを使用して、ガイドRNA（crRNA およびtracrRNAを含む）を簡単に発現できます。crRNA発現細胞集団を対象にフローサイトメトリーベースのソーティングを行う場合はGeneArt CRISPR Nuclease Vector with OFP（オレンジ蛍光タンパク質）を、crRNA発現細胞を対象にビーズベースの濃縮を行う場合はGeneArt CRISPR Nuclease Vector with CD4を選択してください。
 

Image of product box and tubes for the GeneArt CRISPR Nuclease Vector with Orange Fluorescent Protein Reporter Kit

ヒント：初めてCRISPR ゲノム編集を行う場合は、Cas9 DNAプラスミドではなく、TrueCut Cas9 ProteinとTrueGuide Synthetic gRNAを使用することをお奨めします。リボ核タンパク質複合体はトランスフェクション直後に活性化し、CRISPRプラスミドよりも速く核から除去されるため、オフターゲット効果やDNA組み込みの可能性が低減されます。

Plasmid maps of Cas9 nuclease expression vectors with OFP reporter or CD4 reporter.

図1.GeneArt CRISPR nuclease vector maps.このベクターは、ターゲット特異的なcrRNAをコードする二本鎖DNAオリゴを簡単にクローニングできるように、5 bpの5'オーバーハングで予めリニアライズされた状態で提供されます。マップは（A）OFPレポーターを含むベクターおよび（B）CD4レポーターを含むベクターが示されています。gRNA、Cas9、レポーターは同じベクターから発現されます。Cas9は核局在化シグナル（NLS1およびNLS2）により核に向かいます。
 

GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kitを使用したCRISPRプラスミドの作製と発現

図2は、CRISPRベクターを作製して細胞内で発現させるための3ステップのワークフローをまとめたものです。 

 

  1. CRISPR gRNAのターゲット特異的部位をコードする一本鎖DNAオリゴヌクレオチドをデザインします。これらのDNAオリゴをアニーリングしてCRISPR-Cas9ベクターにクローニングします。TrueDesign Genome Editor softwareを用いて、目的の編集に最適なgRNAターゲット領域を決定します。




  2. CRISPRベクターをコンピテント大腸菌細胞（キットに付属）に形質転換、十分な発現プラスミドを生成させます。




  3. CRISPR ベクターで標的細胞をトランスフェクトし、OFPまたはCD4レポーターを使用して、トランスフェクションされた細胞をさらに使用するためにソーティングまたは濃縮します。
     

図2.GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit活用のワークフローターゲット特異的crRNAをコードするDNAオリゴのCas9ヌクレアーゼレポーターベクターへのアニーリングおよびクローニングの後、ベクターをE. coli細胞に形質転換します。必要なCRISPRクローンについてE. coliをスクリーニングし、次にこれを目的の細胞にトランスフェクションしてゲノム編集と解析を行います。
 

  GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kitユーザーガイドをダウンロードする

CRISPRプラスミド設計用GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit注文情報

独自のCRISPRベクターを作製するための製品

GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kitsは、オールインワンのCRISPRプラスミド システムとしての利用に加えて、Cas9プラスミドとgRNAプラスミドを個別に選択することも可能です。

Casヌクレアーゼ発現用プラスミドおよびgRNAクローニングベクターは、オープンアクセスのリソースから入手可能です（非営利グローバルプラスミドリポジトリのAddgeneなど）。gRNA発現用のプラスミドを独自に構築する場合、目的のgRNA配列を含むオリゴヌクレオチドおよびFastDigest制限酵素およびクローニング酵素が必要となる場合があります。
 

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CRISPRプラスミドの形質転換用製品

当社は、Cas9プラスミドを増殖するためのOne Shot MAX Efficiency DH5a T1R Chemically Competent Cellsなどを含むさまざまなコンピテント大腸菌（E. coli）細胞やプラスミドの分離・精製用のPureLink Expi Endotoxin-Free Maxi Plasmid Purification Kitを提供しています。
 

CRISPRプラスミドを細胞内に導入するための製品およびCRISPR編集のバリデーション用製品

CRISPRベクターを効果的に導入するためのトランスフェクション製品
ゲノム編集の結果のバリデーション方法
Cas9タンパク質 
 

CRISPRプラスミドに関するリソースとサポート

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