Search Thermo Fisher Scientific
CRISPR-Cas9用ガイドRNA |
CRISPR-Cas9およびスクリーニングアプリケーション用の高品質gRNA
CRISPR-Cas9システムを用いた遺伝子発現のノックアウトや特定変異のノックインを行う場合、その成功には高品質なガイドRNA（gRNA）の設計、作製、導入が不可欠です。TrueCut Cas9 Proteinで使用するトランスフェクション対応gRNAが必要な場合でも、トランスフェクション困難な細胞や初代細胞でゲノム編集を行なうためのレンチウイルスが必要な場合でも、当社はお客様のニーズにお応えします。 gRNA遺伝子検索ツールを使用して、これらのフォーマットのいずれかで事前に設計されたgRNAを検索するか、後述する選択ガイドに進んでその他の選択肢をご検討ください。
機能ゲノミクスのスクリーニングに関しては、当社の先進的なgRNAデザインがCRISPRライブラリにパッケージ化されており、ハイスループットなアレイ型スクリーニングや経済的なプール型スクリーニングでの利用が可能です。
さまざまなCRISPR gRNAフォーマットから選択する
gRNAの検索と注文用のクイックツールを確認する
TrueGuide Synthetic gRNAの詳細を見る
LentiArray CRISPR gRNAの詳細を見る
IVT gRNAの詳細を見る
CRISPR gRNAフォーマットの選択ガイド
 TrueGuide Synthetic gRNA |  LentiArray Lentiviral gRNA |  Precision gRNA Synthesis Kit | |
| 概要 |
|
|
|
| フォーマット | 合成RNAオリゴ、化学修飾により安定化 | レンチウイルス粒子 | In vitro-transcribed (IVT) gRNA |
| アプリケーション | ノックアウト（デザイン済み）またはノックイン（カスタム） | ノックアウト、ライブラリスクリーニングを含む | ノックアウトまたはノックイン |
| 生物種 |
|
| |
| 導入方法 | 脂質ベースのトランスフェクション試薬またはエレクトロポレーション | レンチウイルスによる形質導入 | 脂質ベースのトランスフェクション試薬またはエレクトロポレーション |
| 推奨Cas9フォーマット | TrueCut Cas9 Protein | LentiArray Cas9 Lentivirus | TrueCut Cas9 Protein |
| コントロール | ポジティブコントロールおよびネガティブコントロール | ポジティブコントロールおよびネガティブコントロール | |
| 注文情報 | 注文情報 | 注文情報 |
gRNAの検索と注文用のクイックツール
デザイン済みの合成またはレンチウイルスCRISPR sgRNAの検索
TrueGuide Synthetic gRNAは、標的遺伝子を特異的かつ高効率にノックアウトできるように設計された、すぐにトランスフェクション可能なCRISPR single guide RNAs (sgRNAs) です。編集した細胞を濃縮する必要がある場合、トランスフェクションが困難な細胞を扱う場合、または長期間のsgRNA発現が必要な場合は、当社のLentiArray CRISPR gRNAをご利用ください。
カスタム合成gRNAの注文
独自の設計をお持ちですか？その由来が学術誌の記事、同僚からの情報、またはお気に入りのデザインツールで構築したであっても、合成したいカスタムgRNA配列があれば、当社のシンプルかつ高速なインターフェースを利用してカスタムTrueGuide gRNAにアップロードしてください。
当社の設計ツールを用いてゲノム編集実験を構築しオリジナルのgRNAを注文
改変細胞株を作製するための設計支援が必要ですか？無料のTrueDesign Genome Editorソフトウェアを使用して、CRISPR遺伝子ノックアウト、ノックイン、タグ付け実験を設計し、そのために必要な試薬一式（gRNAを含む）を確認することができます。
プレート形式のguide RNAやその他の特別注文についてはお問い合わせください。
96ウェルプレートで納品する24個以上のgRNAや、他のヌクレアーゼや特定のスキャフォールド配列でgRNAを使用したい場合は、GEMservices@thermofisher.comまでお問い合わせください。
CRISPR用のTrueDesign Genome Editor
Invitrogen TrueGuide Synthetic gRNAは、すぐにトランスフェクションできるCRISPRガイドRNAであり、独自のアルゴリズムにより編集を効率化するよう設計されています。 これらのデザイン済みで保証されたシングルガイドRNAは、ヒトおよびマウスのゲノム全体において高い特異性での標的ノックダウンを実現します。
TrueGuide 1-piece modified Synthetic gRNA | |
| マウスおよびヒト細胞用のデザイン済みノックアウト | |
| カスタム配列 | |
| バリデートされたコントロールが利用可能 | |
| プレート形式で提供可能 | |
| すぐにトランスフェクション可能 | |
| 化学修飾* | |
| 初代細胞および幹細胞に最適 |
*化学修飾には、編集効率を高め、ヌクレアーゼ分解から保護するための2'O-メチルアナログおよびホスホロチオエート結合が含まれます。
データ：TrueGuide Synthetic gRNAを用いた高効率な編集
図1.Cas9発現ME-180細胞におけるTrueGuide Synthetic gRNAの使用によるキナーゼ遺伝子の強力な切断。平均切断効率は60%以上でした。
データ：TrueGuide Synthetic gRNAは細胞生存率の維持をサポート
図2.最適化されたプロトコルで導入されるTrueGuide Synthetic gRNAは細胞毒性を最小限に抑制Lipofectamine CRISPRMAXを使用して、推奨するトランスフェクションプロトコルを用いて、TrueCut Cas9 Protein v2とターゲット特異的なTrueGuide Synthetic gRNAを複合させて2つのがん細胞株に導入しました。3つの遺伝子座のうち、2つ（PRKCG-T1とCMPK1-T1）は編集の難易度が高いことがわかっていました。細胞生存率の測定にはPrestoBlueを使用しました。その結果、トランスフェクションによる毒性は最小限であり、全体的な細胞生存率はほぼ100%に維持されることが示されました。
TrueGuide Synthetic gRNA—よくある質問（FAQ）
gRNAはガイドRNAの意味で、CRISPR-Cas9システムの一部として利用されています。gRNA分子には、ターゲット特異的なCRISPR RNA（crRNA）と、補助的なトランス活性化crRNA（tracrRNA）という2つのコンポーネントがあります。gRNAは、20 merのcrRNA配列と標的ゲノム配列間の塩基対形成を介して、Cas9タンパク質を特定のゲノム遺伝子座に誘導します。
従来のS. pyogenes CRISPR-Cas9システムでは、CRISPR RNA (crRNA)とtracrRNA がハイブリダイズする2パートガイドを使用していましたが、sgRNAはシングルガイドRNAを意味します。 sgRNAは、これら2つのRNAを単一の長いRNAに結合します。典型的なsgRNAは長さが100 ntあり、ベクターから発現させることも、化学合成することもできます。
修飾sgRNAは、2パートシステムよりも多くの細胞タイプで優れた効率を示すため、TrueGuide crRNA：tracrRNAの2パート構成のガイドRNA製品は販売終了となりました。これにより、当社が提供する合成gRNA製品シリーズはスリム化され、修飾をもつmodified sgRNAの推奨に統一されました。
サーモフィッシャーサイエンティフィックから入手可能なCRISPR gRNAは、化学合成されたRNAオリゴ、パッケージ化されたレンチウイルス粒子、in vitro転写（IVT）gRNAとしてGeneArt Precision gRNA Synthesis Kitにより生成されたものになります。
化学修飾には、分子の5'および3'末端に2'O-メチルアナログおよびホスホロチオエートヌクレオチド間結合が含まれます。これらの修飾は、それぞれ標的部位への結合を増加させ、ヌクレアーゼ分解を阻害することにより、編集効率を高めます。
custom gRNA order toolをご利用いただくと、化学修飾されていないsgRNAを購入することができます。
TrueGuide Synthetic gRNAは、TrueCut Cas9 Proteinとともにトランスフェクションすると、細胞毒性および自然免疫反応を最小限に抑えながら、幅広い種類の細胞で最大の編集効率を提供します。プラスミドベースのシステムとは異なり、RNPシステムは一過性でターンオーバーが速いため、ランダムな統合やオフターゲット効果を最小限に抑えることができます。
TrueGuide Synthetic gRNAの配列は、質量分析によって解析され、配列の完全性が検証されています。
プールされた細胞集団でのCRISPR/Cas9を介した編集効率の推定には、GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit、次世代シーケンス（NGS）、またはサンガーシーケンスを使用することができます。編集された集団のアンプリコンに対するNGS、またはプラスミドにクローニングされたアンプリコンに対するサンガーシーケンス、どちらのシーケンス方法でも編集効率とインデルのタイプをより正確に推定することが可能です。これらの方法の詳細についてはTALEN and CRISPR Validation Tools ページを、プロトコルガイダンスについてはTrueGuide Synthetic gRNA User Guideを参照してください。
トランスフェクション困難な細胞株のスクリーニングと編集に適したLentiArrayレンチウイルスgRNA
Invitrogen LentiArray CRISPR gRNAは、効率的な遺伝子ノックアウト用に設計された、デザイン済みおよびパッケージ化されたgRNAレンチウイルスです。LentiArray CRISPR gRNAのデザインは、独自のgRNAデザインアルゴリズムで行われており、特異性を損なうことなくノックアウト効率を最大化するように最適化されています。
LentiArray CRISPR gRNAは、LentiArray CRISPR Libraryを用いたハイスループットスクリーニング実験において、スクリーニング前のアッセイ開発およびスクリーニング後のヒット検証をサポートするために利用できます。トランスフェクションが困難な細胞株や初代細胞に対するゲノム編集実験を行う場合、LentiArray CRISPR gRNAは、LentiArray Cas9 Lentivirusと併用する必要があります。
データ：LentiArray gRNAを用いたEGFPのノックアウト成功例
図3.LentiArray gRNAを用いたCRISPR-Cas9によるEGFPのノックアウト。(A) A431細胞を、LentiArray Cas9 LentivirusおよびLentiArray CRISPR gRNAを用いてEGFRノックアウト（右列）し、未処理細胞（野生型、左列）およびCas9で処理したがgRNAを処理しなかった細胞（Cas9コントロール、中央列）と比較しました。細胞染色は、EGFR発現（緑色）、核（青色）、細胞骨格F-アクチン（赤色）について行い、免疫蛍光で分析しました。EGFR発現の消失は、EGFRノックアウト細胞でのみ観察されました（c、f）。（B）EGFRシグナルの減少は、EGFRノックアウト細胞対コントロールの標的タンパク質のウエスタンブロットでも観察されました。
IVT gRNAによるカスタムデザインの迅速な生成
GeneArt Precision gRNA Synthesis Kitは、ガイドRNA（gRNA）を迅速に合成するための包括的なシステムです。
このキットでは、ターゲット配列をコードする2つの短い一本鎖オリゴを出発材料とし、T7プロモーターを使用した短い「ワンポット」PCR反応によって、これらのオリゴからgRNAテンプレートを構築します。次に、構築後の生成物をin vitro転写（IVT）反応のテンプレートとして使用します。その後の迅速な精製ステップにより、わずか4時間で高収量（>10 µg）、高濃度（>200 ng/µL）のトランスフェクション可能なgRNAが生成されます。
IVT gRNAと当社のTrueCut Cas9 Protein v2の組み合わせは、さまざまな浮遊および接着胞株で試験済みであり、70%を超える切断効率と、毒性の排除が確認されています。
生成されたgRNAは、すぐにトランスフェクション可能なCRISPR Nuclease mRNAとのコトランスフェクションに使用することもできます。タンパク質およびmRNAのCas9フォーマットは、いずれもプラスミド操作を必要とせず、ハイスループットおよびマルチプレックス ゲノムワイドな細胞工学 アプローチと互換性があります。
IVT gRNA synthesis kit注文情報
Gene editing resources and support
Resources
Support
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Stylesheet for Classic Wide Template adjustments