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Dynabeads®および他の磁気ビーズを用いた免疫沈降
タンパク質サンプルサイズ<2 mL用の推奨IP方法
アガロース／Sepharose®スラリーとカラムが大量のタンパク質または抗体の精製に適しているのに対し、磁気ビーズは特定のタンパク質やタンパク質複合体のより一般的なスモールスケール単離に適しています。タンパク質研究のニーズは1970年代のSepharose®導入以来変化しました。その鍵となるのは容量／収量、再現性、純度、コストです。
There are many myths about IP that we easily break down for you here in these IP Myth videos. If you are looking for an alternative guide to help you find the the optimum IP product, try this interactive video selection guide.
製品
お客様の実験に適した免疫沈降製品を探してください
お客様のタンパク質を認識する抗体があれば、ここでをお選びください
お客様の抗体結合製品選択は、ダウンストリームアッセイが質量分析法か、または抗体をターゲットタンパク質などと共溶出させたくないかのどちらなのかによります。
抗体結合は最も一般的な方法で、お客様のターゲット抗体が直接ビーズに結合できるか、または磁気ビーズ上のプレコートしたリガンドに間接的に結合できる場合に使用します。
抗体結合製品選択ガイド
| Protein A, G, or L | Secondary antibodies (anti-mouse, -rabbit) | Surface- activated beads (epoxy)* | |
|---|---|---|---|
| Binding properties | Non-covalent antibody binding | Non-covalent antibody binding | Covalent antibody binding |
| Antibody co-eluted off the beads | Yes† | Yes† | No |
| Type of ligand | Different ligands bind different species and antibody subclasses with different specificity‡ | Anti-mouse binds mouse IgG1, IgG2a, IgG2b; anti-rabbit binds all rabbit IgGs | All antibodies |
| Mass spec compatible | No | No | Yes |
| Non-specific binding | Low | Low | Ultra-low |
| Coupling time / temp |
| >30 min / 2–8°C | 16–24 hr, 37°C |
| Products | Beads only: Kits: | Beads only: | Kits: |
*追加ターゲットの結合と捕捉のための表面活性化Dynabeads®の選択肢。
†クロスリンクは抗体の共溶出を避けるために行われますが、これはターゲット抗原の収量を下げることがあります。
‡ 抗体適合性表を使用し、弊社のキットとお客様の抗体の適合性をチェックしてください。
お客様のタンパク質を認識するビオチン化抗体（またはリガンド）があれば、ここからお選びください
ストレプトアビジンでコートされたIP用ビーズにビオチン化抗体を使用することの主な利点
- If you have a sample rich in soluble IgGs
- If you have a recombinant antibody lacking Fc regions
- If you already have streptavidin-coated Dynabeads® in the lab
- If you need a bead compatible with mass spectrometry (secondary-coated and epoxy-coated Dynabeads® are also compatible with mass spectrometry)
To allow flexibility, four different types of streptavidin-coupled Dynabeads® are available. View the Dynabeads® streptavidin selection guide to see the different characteristics.
Over the past 25 years, streptavidin-coupled Dynabeads® in combination with a biotinylated ligand have been widely used and are cited in thousands of papers for diverse manual and automated applications. The most widely used application is for purification of nucleic acids (NA), but it is also used for immunoprecipitation (IP).
もし組み替え（融合タグ化）タンパク質をお持ちならここでお選びください
人気の組み替えタンパク質発現のための融合タグ
- Hisタグ—6～9のヒスチジン残基から成ります。主に固定化金属イオンアフィニティクロマトグラフィー(IMAC)に使用されます。
- GST tag—consists of glutathione S-transferase (GST), a complete 211 amino acid protein (26 kDa); primarily used for purification via glutathione agarose resin
- HA tag—consists of a peptide (YPYDVPDYA) derived from the human influenza hemagglutinin (HA) protein; immobilized anti-HA antibodies are used to immunoprecipitate HA-tagged recombinant proteins
- c-Myc tag—consists of a peptide (EQKLISEEDL) derived from the human c-myc oncogene (p62 c-myc); immobilized anti-c-Myc antibodies are used to immunoprecipitate c-Myc-tagged recombinant proteins.
His and GST are not true epitope tags, because they are not usually purified or detected via specific antibodies. By contrast, HA and c-Myc tags are true epitope tags, because their only means of purification or detection is via specific antibodies. Epitope tags are seldom used for bulk purification but are most often used for immunoprecipitation or co-immunoprecipitation (IP, co-IP). Nevertheless, all four of these tag systems can be used for either purification or pull-down applications.
If you’ve got a biotinylated antibody that recognizes the protein you wish to capture, you can create your own affinity product with one of these products.
お客様のタンパク質を認識する抗体があれば、ここでをお選びください
お客様の抗体結合製品選択は、ダウンストリームアッセイが質量分析法か、または抗体をターゲットタンパク質などと共溶出させたくないかのどちらなのかによります。
抗体結合は最も一般的な方法で、お客様のターゲット抗体が直接ビーズに結合できるか、または磁気ビーズ上のプレコートしたリガンドに間接的に結合できる場合に使用します。
抗体結合製品選択ガイド
| Protein A, G, or L | Secondary antibodies (anti-mouse, -rabbit) | Surface- activated beads (epoxy)* | |
|---|---|---|---|
| Binding properties | Non-covalent antibody binding | Non-covalent antibody binding | Covalent antibody binding |
| Antibody co-eluted off the beads | Yes† | Yes† | No |
| Type of ligand | Different ligands bind different species and antibody subclasses with different specificity‡ | Anti-mouse binds mouse IgG1, IgG2a, IgG2b; anti-rabbit binds all rabbit IgGs | All antibodies |
| Mass spec compatible | No | No | Yes |
| Non-specific binding | Low | Low | Ultra-low |
| Coupling time / temp |
| >30 min / 2–8°C | 16–24 hr, 37°C |
| Products | Beads only: Kits: | Beads only: | Kits: |
*追加ターゲットの結合と捕捉のための表面活性化Dynabeads®の選択肢。
†クロスリンクは抗体の共溶出を避けるために行われますが、これはターゲット抗原の収量を下げることがあります。
‡ 抗体適合性表を使用し、弊社のキットとお客様の抗体の適合性をチェックしてください。
お客様のタンパク質を認識するビオチン化抗体（またはリガンド）があれば、ここからお選びください
ストレプトアビジンでコートされたIP用ビーズにビオチン化抗体を使用することの主な利点
- If you have a sample rich in soluble IgGs
- If you have a recombinant antibody lacking Fc regions
- If you already have streptavidin-coated Dynabeads® in the lab
- If you need a bead compatible with mass spectrometry (secondary-coated and epoxy-coated Dynabeads® are also compatible with mass spectrometry)
To allow flexibility, four different types of streptavidin-coupled Dynabeads® are available. View the Dynabeads® streptavidin selection guide to see the different characteristics.
Over the past 25 years, streptavidin-coupled Dynabeads® in combination with a biotinylated ligand have been widely used and are cited in thousands of papers for diverse manual and automated applications. The most widely used application is for purification of nucleic acids (NA), but it is also used for immunoprecipitation (IP).
もし組み替え（融合タグ化）タンパク質をお持ちならここでお選びください
人気の組み替えタンパク質発現のための融合タグ
- Hisタグ—6～9のヒスチジン残基から成ります。主に固定化金属イオンアフィニティクロマトグラフィー(IMAC)に使用されます。
- GST tag—consists of glutathione S-transferase (GST), a complete 211 amino acid protein (26 kDa); primarily used for purification via glutathione agarose resin
- HA tag—consists of a peptide (YPYDVPDYA) derived from the human influenza hemagglutinin (HA) protein; immobilized anti-HA antibodies are used to immunoprecipitate HA-tagged recombinant proteins
- c-Myc tag—consists of a peptide (EQKLISEEDL) derived from the human c-myc oncogene (p62 c-myc); immobilized anti-c-Myc antibodies are used to immunoprecipitate c-Myc-tagged recombinant proteins.
His and GST are not true epitope tags, because they are not usually purified or detected via specific antibodies. By contrast, HA and c-Myc tags are true epitope tags, because their only means of purification or detection is via specific antibodies. Epitope tags are seldom used for bulk purification but are most often used for immunoprecipitation or co-immunoprecipitation (IP, co-IP). Nevertheless, all four of these tag systems can be used for either purification or pull-down applications.
If you’ve got a biotinylated antibody that recognizes the protein you wish to capture, you can create your own affinity product with one of these products.
Dynabeads® 磁気ビーズ比較データ
Dynabeads®磁気ビーズと他社の免疫沈降キットとの比較研究では、当社のキットは優れた精製特性と実験再現性を短縮されたプロトコル時間で提供します。
Dynabeads® Immunoprecipitation Kitで短縮されたプロトコル時間、収量の向上、再現性を
Dynabeads® Protein Aを用いたヒトIgGのアフィニティー精製と、血清 2 μLからのヒト血清アルブミンの免疫沈降
- Lane 1: Purified IgG from serum.
- Lane 2: Immunoprecipitated human serum albumin (cross-linking omitted thus antibody present).
- Lane 3: 50X diluted serum.
- Lane 4: Low-molecular weight markers.
Dynabeads® Protein A Immunoprecipitation Kit vs. 他社製品
すべての製品に抗体5 μgを使い、Daudi 細胞可溶化物に免疫沈降を行いました。各IP実験の10%溶出液をNuPAGE® 4～12% Bis-Trisにロードし、 MESランニングバッファーで電気泳動しました。生じたゲルをSilverQuest ™ Silver Staining Kit （下記参照）で染色しました。
タンパク質溶出特性
ビーズ上の組み替えProtein A/Gはアルブミン結合部位を含まず、そのため混入しているタンパク質の同時精製ができません。溶液中、抗体のビーズへの結合は平衡反応です。できるだけ多くの抗体を捕捉するには、高濃度のビーズと抗体を維持するため、反応体積は小さくしなければなりません。サンプル前処理の必要はありません（粘性のあるサンプルでも）。サンプルやビーズを希釈する必要がないからです。サンプル中の抗体濃度が非常に低いと考えられる場合、ビーズの量は増やして構いません。
As an alternative to eluting antibody from the beads, the Dynabeads® may be re-suspended in a Na-phosphate buffer. To prevent co-elution, it is possible to cross-link the antibody to protein A/G on the beads prior to immunoprecipitation. This is not necessary for downstream SDS-PAGE followed by autoradiography or western blotting, and optional for Silver or Coomassie® staining.
- 再現性がより高い—操作の一貫性は結果の一貫性につながります
- Easier handling—~30 min protocol and no centrifugation helps make magnetic beads popular for those doing IP on a regular basis
- Almost no background—magnetic beads have minimal non-specific binding, and no pre-clearing is necessary
- Antibody savings—all binding occurs on bead outer surface, helping you conserve precious antibodies
- Lower signal-to-noise—easy and efficient washing helps ensure superior contaminant removal
- Gives you more control—designed to help you balance capacity/yield, reproducibility, and purity and reduce overall cost
Dynabeads® IP引用: すべてのソース
Dynabeads® IP引用: Nature
Dynabeads® ChIP引用: すべてのソース
Dynabeads® ChIP引用: Nature
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動画
免疫沈降に関するビデオ - How to use Dynabeads® for immunoprecipitation
- IP On Bench Paper - A Surprising Shift
- Immunoprecipitation in 30 mins: Dynabeads vs Sepharose
- Avoid these 2 problems with sepharose for IP
- IP Myth 1: "Background can't be avoided"
- IP Myth 2: "Pre-clearing is necessary"
- IP Myth 3: "Capacity is crucial"
- IP Myth 4: "Dynabeads® are expensive"
*モバイルユーザーへの注意: 免疫沈降のための選択ガイドはモバイル機器ではインタラクティブになりません。モバイル機器でビデオベースの選択ガイドを見るには、ビデオ記述領域のリンクを使用してください（ビデオ再生ウィンドウの下です）。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.