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Restriction Fragment Length Polymorphisms (RFLP) Analysis
RFLP 解析—DNA 配列の多型では、制限酵素で切断し電気泳動によって分離すると、野生型のフラグメント パターンとは異なる移動度が見られます。
T-RFLP（terminal-RFLP）解析—T-RFLP は、培養細胞に依存しない（末端断片のみを標識および検出する）RFLP 解析法です。16S rRNA（リボソーム RNA）の変異に基づくきわめて複雑な細菌叢の研究に使用されます。 この技術により、ゲノム配列情報を必要とせずに複雑な細菌群を解析できるようになりました。 この解析法は、多様な自然環境に生息する細菌叢を感度や再現性の高い方法で迅速に解析し、環境条件や生理学的条件の変化に伴うこれらの細菌の反応を測定することができます。
Figure 1: Flowchart of steps required for a T-RFLP assay
一般的な T-RFLP 解析は、大きく 5 つのステップに分かれます（図 1、クリックして拡大）。
- DNA の分離と精製
- PCR 増幅と制限酵素による消化
- 電気泳動による消化産物の分離および検出
- 各サンプルのデータ解析によるフラグメント プロファイル作成
- ステップ 4 のサンプル プロファイルに基づくクラスター解析
RFLP 解析の手順
 DNA の抽出は、DNA シーケンシングとフラグメント解析の実験ワークフローにおける重要な第一ステップです。 DNA の配列解析における全体的な読み取りの品質と精度、長さは、サンプル自体の特性と核酸抽出法に大きく左右される可能性があります。 最適な抽出法は、サンプル源や組織の種類、サンプルの入手方法、抽出前の取り扱いもしくは保存方法によって異なります。 推奨製品: DNA単離法 |
制限酵素で PCR アンプリコンを消化します。 推奨製品: 制限酵素による消化最適な酵素をお選びください。 |
 PCR 産物のサンプルをサイズ スタンダードと Hi-Di Formamide の混合液に加え、熱変性して電気泳動します。 推奨製品: 解析サンプルの調製サイズ情報サイジング実験に使用する GeneScan サイズ スタンダードの詳細については、次の表をご覧ください。
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DNA の抽出は、DNA シーケンシングとフラグメント解析の実験ワークフローにおける重要な第一ステップです。 DNA の配列解析における全体的な読み取りの品質と精度、長さは、サンプル自体の特性と核酸抽出法に大きく左右される可能性があります。 最適な抽出法は、サンプル源や組織の種類、サンプルの入手方法、抽出前の取り扱いもしくは保存方法によって異なります。 推奨製品: DNA単離法 |
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RFLP 解析用の推奨製品
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.