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DNAフラグメント解析は、細胞株認証から染色体異数性解析まで
さまざまなアプリケーションを可能にします。次世代シーケンス(NGS)などのシーケンシング技術でもこれらのアプリケーションは可能ですが、研究者は、複数反復領域の検出、結果取得までの時間の短縮、および感度や分解能の向上などの特長を求めてフラグメント解析を選択します。
また、遺伝子座に特異的なプライマーを異なる色の色素で標識することにより、重複する遺伝子座の対立遺伝子を区別し、1回の解析で20以上の遺伝子座の解析することができるなど、マルチプレックス機能により費用対効果にも優れています。
細胞株の誤認は実験結果の誤った解釈や混乱、研究コストの増大を招きます。現在、多くの学術雑誌や研究費助成機関は、使用する細胞株が本物であることを確認するよう、研究者に求めています。フラグメント解析は、シンプルで安価、かつ特異性の高い細胞株の遺伝子的な“はっきりした特徴”を提供することができます。
サンガーシーケンスは、単一遺伝子のシーケンシング、遺伝子変異の確認、反復配列の検出、コピー数多型、および一塩基変異の検出のゴールドスタンダードです。サンガーシーケンスは小規模プロジェクトやNGS結果の確認に最適で、ラボの技術を補完し、効率的なSARS-CoV-2研究に導くことができます。
マイクロサテライトマーカーは、反復するヌクレオチド配列(通常1反復単位あたり2~7ヌクレオチド)を含有する多型DNA遺伝子座です。個々のマイクロサテライト遺伝子座内の大部分の反復は同じ長さですが、特定の遺伝子座の反復数は異なる場合があり、その結果異なる長さの対立遺伝子が生じるため、キャピラリー電気泳動によってフラグメント解析することが可能です。。
CRISPR-Cas9システムはシンプルな細菌免疫系の構成要素に基づいており、もっとも容易で、もっとも正確で、もっとも広く採用されているゲノム編集技術です。どのようなゲノム編集実験でも、その修復過程は完全に効率的かつ正確なものではありません。フラグメント解析は、一次形質転換体のスクリーニングし、編集効率を決定することができます。
相対蛍光定量または定量蛍光PCR(QF-PCR)は、複数のサンプル間で正確なピークの高さまたはピーク面積の比較が必要な、さまざまなフラグメント解析アプリケーションで使用される手法です。この技術を利用する研究アプリケーションには、ヘテロ接合性の喪失(LOH)の評価、異数性アッセイ、および大規模染色体欠失の検出があります。
一塩基多型(SNP)ジェノタイピングは、遺伝的変異の指標となるものです。SNPジェノタイピングは、遺伝的形質の違い、病気のかかりやすさ、薬物療法への反応などの研究に利用されています。Applied Biosystems™ SNaPshot™ MultiplexキットはSNP解析のための堅牢なツールです。このキットは、1つのチューブ、1本のキャピラリーフォーマットで、最大10種類のプライマーとテンプレートの組み合わせの1塩基伸長においてマルチプレックスを可能にします。
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相対蛍光定量または定量蛍光PCR(QF-PCR)は、複数のサンプル間で正確なピークの高さまたはピーク面積の比較が必要な、さまざまなフラグメント解析アプリケーションで使用される手法です。この技術を利用する研究アプリケーションには、ヘテロ接合性の喪失(LOH)の評価、異数性アッセイ、および大規模染色体欠失の検出があります。
細菌人工染色体(BAC)は、プラスミドよりも大きな高分子DNAに対応するために開発されました。生物のゲノム配列を決定したり、遺伝性疾患のモデルを作成するために使用できます。
SSCP解析は、配列の変異(シングルポイント変異などの小規模な変化)を検出します。微生物からヒトまで、多数のサンプル中や、幅広い生物種で異なるゲノム変異を同定することができる、広く利用されているスクリーニング法です。
DNAが制限断片で消化され、電気泳動によりサイズごとに分離されると、DNA配列多型は野生型のフラグメントパターンとは異なる泳動プロファイルを示します。RFLP解析は、疾患に特異的な遺伝子が染色体上のどこに存在するかを特定し、疾患のリスクがある可能性のある人や変異遺伝子のキャリアである人を特定するのに有用です。
Seq It Outでは、皆様の日常的なサンガーシーケンスおよびフラグメント解析の疑問にお答えします。
シーケンスの歴史と研究ニーズに合ったプラットフォームの選び方について学べます。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.