细胞解离和细胞培养用胰蛋白酶

使用 Gibco 细胞解离试剂来分离贴壁细胞和组织

为了获得合适数量的细胞进行研究，必须先从较大培养物中分离出一组细胞。进入：细胞解离。Gibco 胰蛋白酶和替代细胞解离产品是组织和单层细胞的理想之选。提供多种形式，包括酶促和化学形式，以满足研究人员进行贴壁细胞培养的不同需求。探索以下选择指南，为您的细胞培养类型选择正确的细胞解离试剂。

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为您的细胞培养类型选择出色的细胞解离试剂

细胞培养类型	清洗液	解离方法	推荐产品	产品规格	含酚红
连续和强贴壁的细胞系	不含钙、镁的 HBSS 或 PBS	不含钙、镁的胰蛋白酶0.25%平衡盐溶液	0.25%胰蛋白酶（1X）	液体	是
			2.5%胰蛋白酶（10X）	液体	否
			胰蛋白酶（1:250）	粉末	否
传代早期有许多细胞	D-PBS	TrypLE 试剂	TrypLE Express	液体	是
细胞表面蛋白完整性很重要的连续细胞系	不含钙、镁的 HBSS 或 PBS	0.53 mM EDTA 中胰蛋白酶0.05%	0.05%胰蛋白酶 0.53 mM EDTA	液体	是
		0.53 mM EDTA 中胰蛋白酶0.05%	0.05%胰蛋白酶 0.53 mM EDTA（10X）	液体	否
		TrypLE 试剂	TrypLE Express	液体	是
弱贴壁的上皮细胞	不含钙、镁的 HBSS 或 PBS	EDTA，柠檬酸钠中的甘油	细胞解离缓冲液，Hanks	液体	否
弱贴壁的上皮细胞	不含钙、镁的 HBSS 或 PBS	EDTA，柠檬酸钠中的甘油	细胞解离缓冲液，PBS	液体	否
转化的成纤维细胞	不含钙、镁的 HBSS 或 PBS	TrypLE 试剂	TrypLE Express（1X）	液体	是
细胞表面蛋白完整性很重要的原代细胞	不含钙、镁的 HBSS 或 PBS	TrypLE 试剂	TrypLE Express（1X）	液体	是
强贴壁的早期传代细胞系	不含钙、镁的 HBSS 或 PBS	1 mM EDTA 中胰蛋白酶0.25%	0.25%胰蛋白酶 1 mM EDTA	液体	是
		1 mM EDTA 中胰蛋白酶0.25%	胰蛋白酶粉末（1:250）	粉末	否
		PBS 中0.6–2.4个单位/mL 分散酶	分散酶 II	粉末，冻干	否
上皮细胞	0.5–1 mM EDTA	0.5–1 mM EDTA	Versene 溶液1:5,000（PBS 中 0.53 mM EDTA）	液体	否
上皮细胞	0.5–1 mM EDTA	PBS 中0.6–2.4个单位/mL 分散酶	分散酶 II	粉末，冻干	否
强贴壁，上皮和一些肿瘤细胞系	0.5–1 mM EDTA	0.25%带 1 mM EDTA	0.25%胰蛋白酶 1 mM EDTA	液体	是
			Versene 溶液1:5,000（PBS 中 0.53 mM EDTA）	液体	否
			胰蛋白酶粉末（1:250）	粉末	否
		不含钙、镁的 PBS 中0.6–2.4个单位/mL 分散酶	分散酶 II	粉末，冻干	否
厚培养物，多层	1 mM EDTA	胰蛋白酶 0.25%	0.25%胰蛋白酶 1 mM EDTA	液体	是
厚培养物，多层	1 mM EDTA	胰蛋白酶 0.25%	胰蛋白酶粉末（1:250）	粉末	否
富含胶原蛋白的稠密培养物	1 mM EDTA	胶原酶200个单位/mL，1 mM EDTA 在不含钙和镁的平衡盐溶液中	胶原酶，I 型	粉末，冻干	否
			胶原酶，II 型	粉末，冻干	否
			胶原酶，IV 型	粉末，冻干	否
所有贴壁细胞培养物	不含钙、镁的 HBSS 或 PBS	物理/机械	细胞刮棒	–	–

胰蛋白酶和细胞蛋白酶化

胰蛋白酶是一种蛋白水解酶，是分离贴壁细胞培养物和单层细胞的标准方法。这种球状胰腺蛋白酶在赖氨酸和精氨酸的 C 端裂解，分解血管粘附蛋白，并可在细胞收获过程中轻易重悬。

赛默飞世尔科技提供猪胰蛋白酶，EDTA 增强胰蛋白酶以及 TrypLE 酶制剂的配方，这是一种温和的胰蛋白酶样酶。为避免计划外的蛋白质降解，必须使用胰蛋白酶抑制剂灭活有机胰蛋白酶。相比之下，合成胰蛋白酶（如 Gibco TrypLE 产品）通过稀释灭活，无需额外的溶液。

注：如果细胞培养基中含胎牛血清（FBS），在胰蛋白酶化之前需要用平衡盐溶液清洗培养物，以确保胰蛋白酶的功能。

Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red: a medium clear bottle with white and green labeling

胰蛋白酶-EDTA

EDTA 是一种螯合剂，可提高胰蛋白酶分离贴壁细胞的能力。EDTA 将钙和镁结合成六齿结构，削弱细胞间粘附，增强胰蛋白酶对水解靶向肽键的获取。

Gibco 胰蛋白酶-EDTA 由经过电子束验证的辐照猪源蛋白酶制成，并经过 PPV、支原体和 PCV 1/2 污染测试。

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帮助实现与 TrypLE 试剂的温和细胞解离

Gibco TrypLE 试剂是高度纯化的重组细胞解离酶，可替代猪胰蛋白酶。这些试剂非常适合在含血清和无血清条件下解离贴壁依赖细胞系，无需更改方案即可直接替代胰蛋白酶。TrypLE 试剂对细胞温和，在室温下稳定，无动物源性。

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查看比较图：胰蛋白酶、胰蛋白酶 EDTA 与 TrypLE 试剂

	胰蛋白酶	胰蛋白酶-EDTA	TrypLE Express	TrypLE Select
特点	传统标准	增强裂解的胰蛋白酶	更温和、更稳定、成本可比性	更温和、更稳定、不含动物和人成分
应用实例	通用	通用	通用	生物生产/工业应用
来源	猪胰脏	猪胰脏	真菌（无动物源性）	真菌（无动物源性）
生产标准	cGMP 生产	cGMP 生产	cGMP 生产	cGMP，在专用的无动物源性机器上生产
贮存温度	-5至–20℃	-5至–20℃	室温	室温
细胞活力更高			✓	✓
灭活方法	胰蛋白酶抑制剂	胰蛋白酶抑制剂	稀释抑制	稀释抑制