以下是从基质中快速移取各种细胞系同时保持细胞完整性的一种常规程序。此程序并不普遍适用于所有细胞系。应根据经验确定最适合各系统的条件和浓度。 在传代培养时,应定期监测细胞活力。细胞活力应大于 90%。

  1. 使用前将所有试剂加热至 37°C。
  2. 去除细胞中的生长培养基。
  3. 彻底冲洗单层细胞,每个 T75 培养瓶或 100 mm 培养皿使用 5 ml 不含 Ca++ 和 Mg++ 的 PBS。轻轻摇动培养瓶(或培养皿),使溶液在室温下将细胞洗涤30至60秒。吸出冲洗液并丢弃。
  4. 重复步骤3。
  5. 每个 T75 培养瓶或 100 mm 培养皿中加入大约 5 ml 细胞解离缓冲液,然后通过在室温下摇动来轻柔地将细胞洗涤1至2分钟。您可以在显微镜下观察解离情况。 吸出溶液并丢弃。
  6. 用手掌用力拍打培养瓶或培养皿,使细胞脱落。如果细胞不能快速脱附,则在室温下再放置2至5分钟,再次用手掌用力拍打培养瓶。对于贴壁能力更强的细胞(使用 5 ml 以上的解离缓冲液),可能需要重复此操作。细胞明显脱附后,加入至少 5 ml 完全生长培养基。将细胞重悬于生长培养基中。

参考文献:
1. Freshney, R. (1987) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, p. 117, Alan R. Liss, Inc., New York.

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