程序 A:制备可高压灭菌的 MEM 干粉培养基(1X;货号 11700*)

  1. 向尽可能接近最终体积的混合容器中加入 950 mL 蒸馏水。
  2. 将干粉培养基加入室温(15°C 至 30°C)水中并轻轻搅拌。
  3. 冲洗包装内侧,以清除所有残留粉末。
  4. 完全溶解后,用 1 N HCl 将 pH 值调节至4.1至4.2。
  5. 将 95 mL 液体分装到 100 mL 瓶中。请勿盖紧。
  6. 在慢排气循环中,于 121°C 下对培养基高压灭菌至少15分钟。但是,由于设备多变,我们建议您对高压灭菌循环进行认证。
  7. 将培养基冷却至室温。
  8. 在无菌条件下向每个瓶中加入 3 mL 的 7.5% NaHCO3 溶液。混匀。
  9. 如有需要,在无菌条件下添加 L-谷氨酰胺和抗生素溶液、血清或其他添加剂。混匀。
  10. 如有必要,通过在无菌条件下缓慢添加 1 N NaOH 或 1 N HCl 并搅拌,将培养基的最终 pH 值调节至 7.2-7.4。 

程序 B:制备 Leibovitz L-15 干粉培养基(1X;货号 41300*)

  1. 向尽可能接近最终体积的混合容器中加入 950 mL 蒸馏水。
  2. 将干粉培养基加入室温(15°C 至 30°C)水中并轻轻搅拌。请勿将水加热。
  3. 冲洗包装内侧,以清除所有残留粉末。
  4. 通过缓慢添加 1 N NaOH 或 1 N HCl 并搅拌,将 pH 值调节至7.6。
  5. 使用蒸馏水调节最终体积。
  6. 立即使用正压系统,通过 0.2 μm 过滤器的膜过滤功能将培养基处理到无菌容器中。 

程序 C:制备 Iscove 改良杜氏干粉培养基(1X;货号42200*、12200*)

  1. 向尽可能接近最终体积的混合容器中加入 950 mL 蒸馏水。
  2. 将干粉培养基加入室温(15°C 至 30°C)水中并轻轻搅拌。请勿将水加热。
  3. 冲洗包装内侧,以清除所有残留粉末。
  4. 加入 3.024 g 碳酸氢钠/L 培养基。
  5. 使用蒸馏水调节最终体积,搅拌直至溶解。
  6. 不要调节 pH 值。容器保持密闭,直至培养基过滤完成。
  7. 立即使用正压系统,通过 0.2 μm 过滤器的膜过滤功能将培养基处理到无菌容器中。

程序 D:制备干粉培养基

  1. 向尽可能接近最终体积的混合容器中加入 950 mL 蒸馏水。
  2. 将干粉培养基加入室温(15°C 至 30°C)水中并轻轻搅拌。请勿将水加热。
  3. 冲洗包装内侧,以清除所有残留粉末。
  4. 向培养基中加入碳酸氢钠(用量见表1、2)。
  5. 通过缓慢加入并搅拌 1 N NaOH 或
  6. 1 N HCl,将 pH 值调节到所需最终工作 pH 以下0.2到0.3个单位。过滤后 pH 值可能升高0.1至0.3个单位。
  7. 使用蒸馏水调节最终体积。
  8. 立即使用正压系统,通过 0.2 μm 过滤器的膜过滤功能将培养基处理到无菌容器中。

表1:干粉培养基制备(程序 D)

货号*NaHCO3 建议的工作 pH 值
 g/LmL/L 7.5% 溶液 
113000.354.75.9–6.2
210110.8511.357.0–7.4
236002.026.666.8–7.2

表2:干粉培养基制备(程序 D) 

货号*NaHCO3 建议的工作 pH 值
 g/LmL/L 7.5% 溶液 
100120.354.77.0–7.4
110120.354.77.0–7.4
119002.229.37.0–7.4
120002.229.37.0–7.4
121003.749.37.0–7.4
124001.216.07.0–7.4
125002.43832.57.0–7.4
128003.749.37.0–7.4
130180.8511.357.0–7.4
217001.1815.77.5–7.9
221002.7536.66.7–7.1
226002.432.07.1–7.4
234002.026.77.0–7.4
311002.229.37.1–7.4
316003.749.37.0–7.4
318002.026.77.0–7.4
325002.4332.57.1–7.4
415002.229.37.0–7.4
518002.026.77.0–7.4
611002.229.37.0–7.4
236002.026.76.8–7.2
430000.354.76.1–6.3

程序 E:制备干粉培养基(替代配方)

  1. 向尽可能接近最终体积的混合容器中加入 950 mL 蒸馏水。
  2. 将干粉培养基加入室温(15°C 至 30°C)水中并轻轻搅拌。请勿将水加热。
  3. 冲洗包装内侧,以清除所有残留粉末。
  4. 向培养基中加入碳酸氢钠(用量见表3)。
  5. 通过缓慢加入 1 N NaOH 或 1 N HCl 并搅拌,将 pH 值调节到所需最终工作 pH 值以下0.2到0.3个单位。
  6. 过滤后 pH 值可能升高0.1至0.3个单位。
  7. 使用蒸馏水调节最终体积。
  8. 立即使用正压系统,通过膜过滤将培养基处理到无菌容器中。 

表3:干粉培养基制备(程序 E)

货号*NaHCO3 建议的工作 pH 值
 g/LmL/L 7.5% 溶液 
100120.354.77.0–7.4
110120.354.77.0–7.4
217001.17615.77.6–7.9
325002.438157.1–7.4
424001.125157.1–7.4
521003.749.37.0–7.4
100120.354.77.0–7.4

程序 F:液体培养基:使用 10X 浓缩液制备 1X 溶液

要制备一份可接受的最终 1X 溶液,请在无菌条件下执行以下程序。在此方案中使用蒸馏水(货号15230)和 7.5% 碳酸氢钠溶液(货号25080)。还需注意的是,因为我们调节了所有 10X 培养基和 10X 平衡盐溶液浓缩液的 pH 值以提高溶解度,所以您可能需要在稀释后调节 pH 值,并酌情添加碳酸氢钠。

  1. 在无菌条件下使用约 850 mL 蒸馏水稀释 100 mL 的 10X 浓缩液。
  2. 在无菌条件下添加适量的 7.5% 碳酸氢钠溶液。浓度见表4。
  3. 按需使用 1 N HCl 或 1 N NaOH 调节 pH 值。1X pH 值见表3。
  4. 使用蒸馏水调节最终体积。
  5. 将溶液分装到无菌容器中。使用无菌瓶盖盖紧瓶子,并储存在建议的温度下(参见产品标签)。

表4:稀释并加入 7.5% 碳酸氢钠溶液(货号25080)后的培养基 pH 值

货号*  
10X 溶液的
pH 值
NaHCO3 1:10 稀释

添加 NaHCO3
的 pH 值a
     1X 溶液的 pH 值a              
                      g/LmL/L 7.5% 溶液  
114304.8–5.32.229.37.6–7.97.0–7.4
118252.4–2.72.229.37.6–7.97.1–7.4
21180 2.0–2.82.229.37.6–7.97.1–7.4
214304.8–5.32.229.37.6–7.97.0–7.4

a:pH 值的范围因稀释用水的 pH 值不同而异。

*用于体外诊断。注意:不可用于人或动物的治疗。
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