ACK(铵-氯-钾)裂解缓冲液主要用于裂解含白细胞样品(比如用 EDTA 处理过的全血、血沉棕黄层和骨髓)中的红细胞。
- 通过静脉穿刺采集全血至经 EDTA 处理的采集管中。
- 用移液器将 1 mL 经 EDTA 处理的全血移入室温下含有 10-20 mL Gibco™ ACK 裂解缓冲液的试管中。
- 让血样与 ACK 裂解缓冲液在室温下孵育 3 – 5 分钟。在此孵育过程中应会明显可见红细胞裂解。
- 在室温下以 300 × g 的设置离心5分钟以收集白细胞。
- 吸出上清液,留下约 50 uL 液体以避免扰动沉淀物。
- 轻轻混匀细胞和剩余的液体,然后加入 5 mL 冷磷酸盐缓冲生理盐水。
- 混匀细胞与磷酸盐缓冲生理盐水,然后通过在 2-8℃ 下以 300 x g 的设置离心5分钟来收集细胞。
- 吸出上清液,然后在 2-8°C 下将细胞重悬于按需添加了载体蛋白的磷酸盐缓冲生理盐水中。
- 细胞随时可用于进一步分析。