以下是从基质中快速移取各种细胞系同时保持细胞完整性的一种常规程序。此程序并不普遍适用于所有细胞系。应根据经验确定最适合各系统的条件和浓度。在传代培养时,应定期监测细胞活力。细胞活力应大于 90%。
- 移除并丢弃用过的细胞培养基。
- 使用不含钙和镁的平衡盐溶液洗涤细胞,或使用 EDTA 洗涤细胞。 将洗涤液加入培养瓶中细胞对侧位置。通过摇动培养瓶来冲洗细胞层1至2分钟,然后丢弃洗涤液。
- 将所选的解离溶液以 2-3 ml/25 cm2 添加至培养瓶中细胞对侧位置。 确保解离溶液覆盖细胞层。 将培养瓶置于 37°C 下孵育。轻轻摇动培养瓶。 通常,细胞在5至15分钟内解离。解离细胞所需的实际时间会因细胞系而异。 小心监测过程,避免细胞损伤。 对于非常难以从基质中移取细胞系的培养瓶,除轻轻摇动外,还可能需要轻拍以加快移取。
- 细胞完全脱附后,竖直放置培养瓶,使细胞流向培养瓶底部。 将完全培养基加入培养瓶。 通过在单层细胞表面上方重复移液来分散细胞。 对细胞进行计数和传代培养。
参考文献:
- Freshney, R. (1987) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, p. 117, Alan R. Liss, Inc., New York.
14190144,15400054,15090046,12604013,C10227