抗生素和抗真菌剂的使用

应根据各个研究者的需求和经验来决定是否使用抗生素防止污染。下表是在细胞培养基中使用 Gibco 抗生素的一般指南。给定的浓度适用于含血清的细胞培养基；无无血清培养基通常需要更低浓度。您还可以选择使用一种或多种抗生素结合一种抗真菌剂的溶液。对于所有培养基类型，应根据经验确定最适当的抗生素和抗真菌剂浓度。

抗生素	建议浓度	抗生谱	在 37°C 培养基中的稳定性
抗 PPLO 试剂泰乐菌素	10 – 100 μg/ml	支原体和革兰氏阳性菌	3天
FUNGIZONE®（两性霉素 B）	0.25 – 2.5 μg/ml	真菌和酵母菌	3天
硫酸庆大霉素	5 – 50 μg/ml	革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和支原体	5天
硫酸卡那霉素	100 μg/ml	革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和支原体	5天
硫酸新霉素	50 μg/ml	革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌	5天
制霉菌素	100 U/ml	真菌和酵母菌	3天
青霉素 G	50 – 100 U/ml	革兰氏阳性菌	3天
硫酸多粘菌素 B	100 U/ml	革兰氏阴性菌	5天
硫酸链霉素	50 – 100 μg/ml	革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌	3天

使用抗生素和抗真菌剂净化培养物

当一种不可替代的培养物受到污染时，研究人员可能会尝试消除或控制污染。

首先，确定污染物是否为细菌、真菌、支原体或酵母菌。将被污染的培养物与其他细胞系分离开来。使用实验室消毒剂清洁培养箱和层流通风罩，并检查 HEPA 过滤器。高浓度抗生素和抗真菌剂可能对某些细胞系具有毒性；因此应执行剂量效应测试以确定抗生素或抗真菌剂的毒性水平。当使用抗真菌剂（如 FUNGIZONE）或抗生素（如泰乐菌素、环丙沙星或 M-Plasmocin）时，这一点尤为重要。

以下是建议用于确定毒性水平和净化培养物的程序。

在无抗生素培养基中进行细胞分离、计数和稀释。将细胞稀释至常规细胞传代所用的浓度。
将细胞悬液分装到多孔培养板或几个小培养瓶中。向每个孔中添加一系列浓度的抗生素。例如，对于 FUNGIZONE，浓度为 0.25、0.50、1.0、2.0、4.0 和 8.0 μg/ml。
每天观察细胞是否出现毒性迹象，如脱落、出现空泡、汇合度下降和变圆。
确定抗生素的毒性水平后，使用抗生素在毒性浓度的 1/2 或 1/3 浓度水平下培养细胞两代至三代。
在无抗生素培养基中培养细胞一代。
重复步骤4。
在无抗生素培养基中培养细胞4至6代，以确定是否已消除污染。

使用抗生素和抗真菌剂净化培养物

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