应根据各个研究者的需求和经验来决定是否使用抗生素防止污染。下表是在细胞培养基中使用 Gibco 抗生素的一般指南。给定的浓度适用于含血清细胞培养基无无血清培养基通常需要更低浓度。您还可以选择使用一种或多种抗生素结合一种抗真菌剂的溶液。对于所有培养基类型,应根据经验确定最适当的抗生素和抗真菌剂浓度。

抗生素建议浓度抗生谱在 37°C 培养基中的稳定性
抗 PPLO 试剂泰乐菌素10 – 100 μg/ml支原体和革兰氏阳性菌3天
FUNGIZONE®(两性霉素 B)0.25 – 2.5 μg/ml真菌和酵母菌3天
硫酸庆大霉素5 – 50 μg/ml革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和支原体5天
硫酸卡那霉素100 μg/ml革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和支原体5天
硫酸新霉素50 μg/ml革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌5天
制霉菌素100 U/ml真菌和酵母菌3天
青霉素 G50 – 100 U/ml革兰氏阳性菌3天
硫酸多粘菌素 B100 U/ml革兰氏阴性菌5天
硫酸链霉素50 – 100 μg/ml革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌3天

使用抗生素和抗真菌剂净化培养物

当一种不可替代的培养物受到污染时,研究人员可能会尝试消除或控制污染。

首先,确定污染物是否为细菌、真菌、支原体或酵母菌。将被污染的培养物与其他细胞系分离开来。 使用实验室消毒剂清洁培养箱和层流通风罩,并检查 HEPA 过滤器。 高浓度抗生素和抗真菌剂可能对某些细胞系具有毒性;因此应执行剂量效应测试以确定抗生素或抗真菌剂的毒性水平。 当使用抗真菌剂(如 FUNGIZONE)或抗生素(如泰乐菌素、环丙沙星或 M-Plasmocin)时,这一点尤为重要。

以下是建议用于确定毒性水平和净化培养物的程序。

  1. 在无抗生素培养基中进行细胞分离、计数和稀释。 将细胞稀释至常规细胞传代所用的浓度。
  2. 将细胞悬液分装到多孔培养板或几个小培养瓶中。 向每个孔中添加一系列浓度的抗生素。例如,对于 FUNGIZONE,浓度为 0.25、0.50、1.0、2.0、4.0 和 8.0 μg/ml。
  3. 每天观察细胞是否出现毒性迹象,如脱落、出现空泡、汇合度下降和变圆。
  4. 确定抗生素的毒性水平后,使用抗生素在毒性浓度的 1/2 或 1/3 浓度水平下培养细胞两代至三代。
  5. 在无抗生素培养基中培养细胞一代。
  6. 重复步骤4。
  7. 在无抗生素培养基中培养细胞4至6代,以确定是否已消除污染。

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