解冻冻存细胞

解冻程序会对冻存培养物造成压力。使用良好的技术迅速操作，可以确保在该过程中细胞更高的存活率。 与其他细胞培养操作相同，我们建议您在冻存和解冻时严格遵守细胞和其他试剂随附的使用说明，以获得最佳结果。

• 在 37°C 水浴中快速（< 1分钟）解冻冻存的细胞。
• 孵育前，使用预热的生长培养基缓慢稀释解冻的细胞。
• 将解冻细胞以高密度铺板，以优化回收率。
• 始终使用适当的无菌技术，并在生物安全柜中进行操作。
• 应始终穿戴个人防护设备，包括面罩或护目镜。在液相中储存的冻存小管在解冻时存在爆炸风险。
• 一些冷冻培养基含有 DMSO，已知 DMSO 可促进有机分子进入组织。使用设备处理含 DMSO 的试剂

• 装有冷冻细胞的冻存管
• 完全生长培养基，预热至 37°C
• 一次性无菌离心管
• 37°C 水浴
• 70% 乙醇
• 经组织培养处理的培养瓶、培养板或培养皿

以下方案描述了解冻冻存细胞的通用步骤。具体方案，请始终参阅细胞特定产品说明书。

1. 从液氮储存中取出装有冷冻细胞的冻存管，并立即将其放入 37°C 水浴中。
2. 通过在 37°C 水浴中轻轻旋转冻存管，快速解冻细胞（< 1分钟），直到样品瓶中只剩少量冰。
3. 将样品瓶转移到生物安全柜中。打开前，用 70% 乙醇擦拭样品瓶外部。
4. 将解冻的细胞逐滴滴入离心管中，管中预置了细胞系所需的适量预热完全生长培养基。
5. 以约 200 × g 离心细胞悬液 5-10 分钟。细胞类型不同，实际离心速度和时间也不同。
6. 离心后，检查上清液的澄清度和完整团块的可见性。在不干扰细胞团块的情况下，无菌倾析上清液。
7. 将细胞轻轻重悬于完全生长培养基中，并转移至合适的培养容器和推荐的培养环境中。