Zenon® ラベリングテクノロジー

Zenon® ラベリングテクノロジーは、ヒト、マウス IgG1、IgG2a、および IgG2b 抗体およびウサギ IgG 抗体用の簡便なシステムです。Zenon® フラグメントは一次抗体の Fc 部分を標的として結合するようデザインされており、少量の一次抗体の迅速なラベリングが可能です (図 1)。Zenon® ラベリングテクノロジーはシンプル、効果的で、全体のラベリング手順はたった10分しかかかりません。

Zenon®-抗体複合体は一度形成されると、使用時まで保存することが可能です。使用前に非特異的なIgGを添加して、非結合性のZenon® フラグメントをブロックするだけで、カラムによる精製の必要はありません。Zenon® 複合体はその後直接サンプルへと適用可能です。

Zenon® ラベリングテクノロジーを使用した標識済み抗体は、直接標識済みの抗体コンジュゲートで観察されるのと同様な蛍光強度あるいは酵素活性を現します (図２)。

図1.Zenon® ラベリングテクノロジーの機構Zenon® 抗体ラベリングによる非共有結合的ラベリングと、Microscale、Monoclonalおよび Protein ラベリングキットによる共有結合的ラベリングの比較。

図2Zenon® ラベリングテクノロジーは、直接コンジュゲートから取得したものと同様かあるいはそれよりも良好な輝度を持つ抗体コンジュゲートを産生します。さまざまなリンパ球マーカーに対する抗体を、アロフィコシアニン (APC) との共有結合あるいは 1 μg の Zenon® APC 複合体との非共有結合のいずれかによって標識。標識済み抗体は、その後ヒト末梢血リンパ球サンプルを染色するために使用した。Zenon® 染色複合体の輝度は、Zenon® ラベリング テクノロジー試薬の混合比率を一次抗体に対して増加させることによりさらなる増強も可能です。

Zenon® ラベリング テクノロジーは、ご使用のアプリケーションあるいは抗体への特定の蛍光との相性により蛍光色あるいは試験方法を変えたい場合に高い柔軟性を提供します。選択肢の多いらべリングおよび本ラベリング テクノロジーの汎用性は、フローサイトメトリー (図３) および蛍光イメージング (図4および 5) でのマルチカラーアプリケーションへの異なる色の組み合わせでの実験を容易にしています。

		図3フローサイトメトリーにおける、Zenon® ラベリングテクノロジーの使用。ヒト末梢血リンパ球を以下の3種類の抗体で染色した：Zenon® Alexa Fluor®647 マウスIgG1 ラベリングキット(Z25008)でラベル化した抗CD3 マウスIgG1 抗体(A21330)、 Zenon® R-Phycoerythrin マウスIgG1 ラベリングキット(Z25055) でラベル化した抗CD4 マウスIgG1 抗体(A21334) およびZenon® Alexa Fluor® 488 マウスIgG2a ラベリングキット(Z25102)でラベル化した抗CD8 マウスIgG2a 抗体(A21338)。 パネル A および B は、それぞれ橙色蛍光シグナルvs緑色蛍光シグナル、および赤色蛍光シグナルvs橙色蛍光シグナルをプロットし、Zenon® ラベリング テクノロジーが同一サンプル内においてその他の抗体に移動しないことを実証した。このサンプルをCoulter Elite フローサイトメーターを用いて488 nmレーザーをR-フィコエリスリンとAlexa Fluor®の励起用に、 Alexa Fluor® 647 色素励起用に 633 nm のレーザーを使用して解析した。
		図4.蛍光イメージングにおけるZenon® ラベリングテクノロジーの使用。 Zenon® Alexa Fluor® 488 マウスIgG1 ラベリングキットKit (Z25002) を使用してラベル化した抗α-チューブリン抗体（A11126）で染色したマウス海馬の14 µmの冠状切片。この部位はNeuroTrace® 530/615 赤色蛍光Nissl 色素(N21482) により神経細胞小体を視覚化するために対比染色され、Hoechst 33258 (H1398, H3569, H21491) で核を染色した。
		図5.  蛍光イメージングにおけるZenon® ラベリングテクノロジーの使用。チューブリンおよびミトコンドリア用プローブで標識済みのウシ肺動脈内皮細胞およびミトコンドリア。チューブリンは、Zenon® Alexa Fluor® 488 マウスIgG2b ラベリングキット (Z25202)で標識済みの抗α-チューブリンマウスIgG2b モノクローナル抗体で検出され、ミトコンドリアはZenon® Alexa Fluor® 555 マウスIgG2b ラベリングキット (Z25205)で標識済みの抗OxPhos Complex V サブユニットα, マウスIgG2b モノクローナル抗体(A21350) でラベルした。核はDAPI (D1306, D3571, D21490)で染色。