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BCAアッセイおよびLowryアッセイ
銅ベースの総タンパク質定量
BCAタンパク質アッセイは、総タンパク質の比色検出および定量の一般的な方法です。Pierce BCA Protein Assayは、Coomassie色素ベースのアッセイ（Bradford）と比べて独自の利点があります–最大5%の界面活性剤（detergents）を含有するサンプルに適合し、タンパク質の組成の違いによる影響を受けにくいため、タンパク質間の均一性が高いというユニークな利点があります。
使いやすさを向上させるために、BCAタンパク質アッセイをdilution-free protein standardsとともに使用すると、アッセイセットアップ時間を最大80%短縮できます。dilution-free protein standardsは希釈済みスタンダード液のセットで、マルチチャンネルピペットに対応するフォーマットにパッケージされているため、一度に全希釈済みスタンダード液を簡単にマイクロプレートに移すことができます。
サンプルに適したBCAタンパク質アッセイの選択
 |  |  |  | |
| Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay | Pierce BCA Protein Assay Kit with Dilution-Free BSA Protein Standards | Pierce BCA Protein Assay - Reducing Agent Compatible | Micro BCA Protein Assay | |
|---|---|---|---|---|
| アッセイ範囲：（サンプル量） | 20～10,000 µg （10 µL） | 20～2,000 µg/mL （25 µL） | 125～2,000 µg/mL （9 µL） | 2～40 µg/mL （150 µL）または 0.5～20 µg/mL（500 µL） |
| 反応時間と温度 | 室温で5分 | 37℃で30分 | 37℃で45分 | 60℃で60分 |
| 総アッセイ時間 | 10分 | 45分 | 115分 | 130分 |
| 吸光度測定 | 480 nm | 562 nm | 562 nm | 562 nm |
| 適合する試薬 | 界面活性剤 | 界面活性剤 | 界面活性剤／還元剤（DTTなど） | 界面活性剤 |
| 適合しない試薬 | 還元剤；キレート剤 | 還元剤；キレート剤 | キレート剤 | 還元剤；キレート剤 |
| 均一性 | タンパク質間変動はBradfordアッセイより小さい | タンパク質間変動はBradfordアッセイより小さい | タンパク質間変動はBradfordアッセイより大幅に（14～23%）小さい | タンパク質間変動はBradfordアッセイより小さい |
| Dilution-free protein standards | 同梱 | 同梱 | 同梱なし | 同梱なし |
| カタログ番号 | A55860（500 mL） A55861（250 mL） A55862（20 mL） | A55864（1000 mL） A55865（500 mL） 関連するBCAキット： 23225（1000 mL） 23227（500 mL） | 23250（275 mL／キット） 23252（マイクロプレート） | 23235（500 mL／キット） |
| 関連製品：Pierce Dilution Free BSAProtein Standards, Multichannel Pipette Compatible, 0.125–2 mg/mL 関連製品：Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards, Multichannel Pipette Compatible, 0.125–10 mg/mL | ||||
BCAキットの概要
- Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay – 緑色から黄色（A480 nm）、2成分、高精度、界面活性剤適合アッセイで、総タンパク質をタンパク質スタンダードと対比。室温で5分間反応。
- BCA Protein Assay with Dilution-Free BSA Protein Standards – 緑色から紫色（A562 nm）、2成分、高精度、界面活性剤適合アッセイ試薬で、総タンパク質濃度をタンパク質スタンダードと対比。37℃で30分間反応。
- BCA Protein Assay - Reducing Agent Compatible – 当社のBCA試薬キットの還元剤適合バージョンで、DTTまたはBMEチオール還元剤を含有するサンプルのタンパク質濃度を測定。
- Micro BCA Protein Assay – 希釈タンパク質溶液（0.5～20 μg/mL）の総タンパク質濃度を測定。3成分。
簡単、迅速、正確
一部のBCAアッセイにはDilution-Free BSA Protein Standardsが含まれています。この標準液は、マルチチャンネルピペットに対応するよう独自に設計された、7つの希釈済みBSA標準のセットです。
Pierce Dilution-Free standardsは、標準曲線を作成する際の時間と手間のかかる希釈を排除できます。また、米国国立標準技術研究所（NIST）の精製BSAと直接比較して校正されています。
BCAアッセイの原理
BCAベースのタンパク質アッセイの化学
Pierce BCA Protein Assayは、アルカリ媒体中のタンパク質によってCu2+がCu+に還元すること（ビューレット反応としても知られる）と、ビシンコニン酸（BCA）による一価銅イオン（Cu+）の高感度で高選択性の比色検出を組み合わせています。
図1.最初のステップはアルカリ性環境でのタンパク質による銅のキレート化で、これは青色の錯体を形成します。この反応では、酒石酸カリウムナトリウムを含有するアルカリ環境で、3つ以上のアミノ酸残基を含有するペプチドが二価銅イオンと有色キレート錯体を形成します。
単一のアミノ酸とジペプチドはビューレット反応で影響を受けませんが、トリペプチドや高分子のポリペプチドまたはタンパク質は反応して、540 nmの光を吸収する水色～紫色の複合体を形成します。1つの二価銅イオンは、4～6つの近隣のペプチド結合と有色の配位錯体を形成します。生成される色の強度は、反応に関与するペプチド結合の数に比例します。
図2.2番目のステップでは、高感度で選択性の高い比色検出試薬であるBCA試薬が、最初のステップで形成された一価銅陽イオン（Cu+）と反応して紫色を生成します。
BCA／銅錯体は水溶性で、562 nmで強い線形吸光性を示し、タンパク質濃度の増加に比例します。紫色は、550～570 nmの任意の波長で測定でき、シグナルの損失は最小限（10%未満）です。BCA試薬により発生するシグナルは、ビューレット試薬を使用したシグナルよりも約100倍高感度（つまり、より検出限界が低い）です。
Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA protein assayは従来のBCAアッセイと同じ銅還元法を採用していますが、独自の銅キレート剤を使用しています。発色反応の2番目のステップでは、Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCAキレート剤が最初のステップで形成された還元（一価銅）陽イオン（Cu+）と反応し、強い金色の反応産物を生成します。銅錯体は水溶性で、480 nmで強い線形吸光性を示し、タンパク質濃度の増加に比例します。
Dilution-free BCA protein assays
Dilution-free BCA protein standardsは個別に、または他のBCAタンパク質アッセイの一部としてご利用いただけます。Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assayを使用すると、サンプルや標準液を希釈する必要がないため、Bradford AssayまたはPierce BCA Protein assay kitと比較して、アッセイのセットアップを最大80%低減できます。さらに、室温で5分間インキュベートするだけです。希釈不要のBSAタンパク質スタンダードは、BCA Protein Assay Kitwith Dilution-Free BSA Protein Standardsにも含まれています。
図3.Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCAAssayは他のタンパク質アッセイと比較してセットアップ時間を最大80%短縮。アッセイは、メーカーのプロトコルに従って、マイクロプレートフォーマットで実施しました。5つの細胞溶解物および5つの精製タンパク質の、合計10種類のサンプルを準備しました。BCAおよびBradfordアッセイの標準曲線は、2 mg/mLのウシ血清アルブミン（BSA）スタンダードの段階希釈により作成しました。Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Assayの標準曲線は、マルチチャンネルピペット対応のチューブストリップにパッケージされたPierce Dilution-Free BSAProtein Standards（キットに付属）を使用して作成しました。10個のサンプルのうち4つは原液濃度が>2 mg/mLであることが予想されたため、BCAおよびBradfordアッセイ用にはサンプルを希釈するステップが必要でした。一方、Dilution-Free Rapid Gold BCA Assay用にはサンプルを希釈する必要はありませんでした。その後、サンプルを各アッセイのワーキング試薬と混合し、メーカーの説明書に従ってインキュベートしました。
BCAアッセイの利点
BCAタンパク質の定量
BCAアッセイの主な利点の1つは、リニアな検量線を生成できることです。この検量線は、未知のタンパク質濃度の正確な測定を可能にし、他の標準的なアッセイよりも広いダイナミックレンジを提供します。
図4.Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assayは、幅広いダイナミックレンジ（0～10 mg/mL）で検量線を生成。検量線はPierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assayおよび他社の精製BSAを用いて作成しました（0～10 mg/mL）。どちらのアッセイも、メーカーの説明書に従って、マイクロプレートフォーマットで実施しました。吸光度の読み取りにはThermo Scientific Varioskan LUXマルチモードマイクロプレートリーダーを使用しました。
BCAアッセイの正確性
BCAタンパク質アッセイのもう1つの主な利点は、タンパク質間のばらつきが少ないことで示される正確性です。タンパク質はその組成や構造が多様で、一部のアッセイでは、タンパク質のアミノ酸配列、等電点（pI）、二次構造、および側鎖または補欠分子族における違いにより、比色反応にばらつきが生じます。BCAの化学的特性は、存在するペプチド結合の数に比例して発色反応を生じるため、色素結合アッセイ（Bradfordアッセイなど）と比較してこの違いによる影響が少なく、タンパク質間のばらつきが少なくなります。
図5.Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assayおよび他社のBradfordタンパク質アッセイのタンパク質定量結果を既知濃度のサンプルと比較したもの。どちらのアッセイも、各メーカーのプロトコルに従って、マイクロプレートフォーマットで実施しました。Bradfordアッセイでは、5 μLのサンプルを250 μLのBradfordワーキング試薬に添加し、室温で5分間インキュベートしました。Dilution-Free Rapid Gold BCAProtein Assayでは、10 μLのサンプルを200 μLのDilution-Free Rapid Gold BCAワーキング試薬に添加し、室温で5分間インキュベートしました。タンパク質サンプルの既知の濃度は、メーカーの表示濃度に基づいており、280 nmでの吸光度により確認しました。
BCAタンパク質アッセイプロトコル
BCA Protein Assay with Dilution-Free BSA Protein Standards
Pierce BCA Protein Assayは、未知サンプルのタンパク質濃度を検出するのに必要なダイナミックレンジに基づいて、2種類の異なるフォーマットを使用して実施できます。このBCAアッセイは、次の2成分システムを使用して、20～2,000 μg/mLのタンパク質濃度を検出します：試薬A（BCA試薬を含有する炭酸塩バッファー）と試薬B（硫酸銅溶液）。これらを組み合わせると、青リンゴの緑色のワーキング溶液が作製され、タンパク質の存在下で37℃で30分間インキュベートすると紫色に変わります。発色反応は真のエンドポイント反応ではないため、Pierce BCA Protein Assayでは高いプロトコルの柔軟性を得られます。インキュベーション温度を上げることで、アッセイの感度を向上できます。強化されたチューブプロトコル（すなわち、60℃で30分間インキュベート）を使用すると、アッセイのワーキングレンジは5～250 μg/mLになり、より希釈されたサンプルの検出が容易になります。
図6.BCA Protein Assay Kit with Dilution-Free BSA Protein Standards, multichannel pipe compatible protocol.
Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay Kit protocol
Dilution-Free Rapid Gold BCAProtein Assayは、BCAアッセイの高い感度と直線性を実現しますが、わずかな時間で実施できます。BCAワーキング溶液を混合して、サンプルおよびdilution-free standardsをマイクロプレートに添加し、室温で5分間インキュベートして、吸光度を読み取るだけです。
図7.Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay Kit protocol.
 Modified Lowry Protein Assay Kit（英語） | |
| アッセイ範囲：マイクロプレート（サンプル量） | 10～1,500 µg/mL （40 µL） |
| アッセイ範囲：キュベット （サンプル量） | 1～1,500 µg/mL （200 µL） |
| 反応時間と温度 | 室温で10分間および30分間 |
| 総アッセイ時間 | 110分 |
| 吸光度測定 | 750 nm |
| 適合する試薬 | SDS（最大1%） |
| 適合しない試薬 | 還元試薬、キレート剤、界面活性剤、トリス、トリシン、グリセロール |
| 均一性 | タンパク質間変動はCoomassie色素法に比べて小さい |
| 製品のサイズ： | 530 mL／キット |
| カタログ番号 | 23240 |
| 関連製品：Pierce Dilution Free BSAProtein Standards, Multichannel Pipette Compatible, 2 mg/mL | |
Lowryアッセイの原則
Pierce Modified LowryProtein Assayは、1951年にOliver H. Lowryが導入した比色法に基づいています。Pierce modified assayは、従来の2つの不安定な試薬をより安定した1つの試薬で置き換えています。
PierceModified Lowry Assayの化学
Pierce Modified Lowry Protein Assayは、銅-キレート化学が関わる、強化ビューレットアッセイです。Pierce Modified Lowry Protein Assayの色形成メカニズムはPierce BCAProtein Assayのそれと似ていますが、2つの方法の間には大きな違いがいくつかあります。Pierce Modified Lowry Protein Assayを使用した色形成の正確なメカニズムは完全には解明されていませんが、反応は2つの独立したステップで起こることが分かっています。まず、タンパク質を室温で10分間インキュベートすると、酒石酸塩の存在下でアルカリ性硫酸銅と反応します。このインキュベーションの間に、4つのペプチド結合と1つの銅原子から四座配位銅錯体が形成され、水色に発色します（これが「ビウレット反応」です）。インキュベーション後、フォリンフェノール試薬を添加します。四座配位銅錯体が電子をリンモリブデン-リンタングステン酸錯体（フォリンフェノール試薬）に移動させる際に色が増強すると考えられています。この反応によって生成される還元リンモリブデン-リンタングステン酸錯体は、濃い青色をしています。
図8.Pierce Modified Lowry Protein Assay Kitの反応の概略図。
図9.Pierce Modified Lowry Protein Assay protocol
マニュアル＆プロトコル
アプリケーション＆テクニカルガイド
その他の資料
| | | | |
| Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay | Pierce BCA Protein Assay Kit with Dilution-Free BSA Protein Standards | Pierce BCA Protein Assay - Reducing Agent Compatible | Micro BCA Protein Assay | |
|---|---|---|---|---|
| アッセイ範囲：（サンプル量） | 20～10,000 µg （10 µL） | 20～2,000 µg/mL （25 µL） | 125～2,000 µg/mL （9 µL） | 2～40 µg/mL （150 µL）または 0.5～20 µg/mL（500 µL） |
| 反応時間と温度 | 室温で5分 | 37℃で30分 | 37℃で45分 | 60℃で60分 |
| 総アッセイ時間 | 10分 | 45分 | 115分 | 130分 |
| 吸光度測定 | 480 nm | 562 nm | 562 nm | 562 nm |
| 適合する試薬 | 界面活性剤 | 界面活性剤 | 界面活性剤／還元剤（DTTなど） | 界面活性剤 |
| 適合しない試薬 | 還元剤；キレート剤 | 還元剤；キレート剤 | キレート剤 | 還元剤；キレート剤 |
| 均一性 | タンパク質間変動はBradfordアッセイより小さい | タンパク質間変動はBradfordアッセイより小さい | タンパク質間変動はBradfordアッセイより大幅に（14～23%）小さい | タンパク質間変動はBradfordアッセイより小さい |
| Dilution-free protein standards | 同梱 | 同梱 | 同梱なし | 同梱なし |
| カタログ番号 | A55860（500 mL） A55861（250 mL） A55862（20 mL） | A55864（1000 mL） A55865（500 mL） 関連するBCAキット： 23225（1000 mL） 23227（500 mL） | 23250（275 mL／キット） 23252（マイクロプレート） | 23235（500 mL／キット） |
| 関連製品：Pierce Dilution Free BSAProtein Standards, Multichannel Pipette Compatible, 0.125–2 mg/mL 関連製品：Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards, Multichannel Pipette Compatible, 0.125–10 mg/mL | ||||
BCAキットの概要
- Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay – 緑色から黄色（A480 nm）、2成分、高精度、界面活性剤適合アッセイで、総タンパク質をタンパク質スタンダードと対比。室温で5分間反応。
- BCA Protein Assay with Dilution-Free BSA Protein Standards – 緑色から紫色（A562 nm）、2成分、高精度、界面活性剤適合アッセイ試薬で、総タンパク質濃度をタンパク質スタンダードと対比。37℃で30分間反応。
- BCA Protein Assay - Reducing Agent Compatible – 当社のBCA試薬キットの還元剤適合バージョンで、DTTまたはBMEチオール還元剤を含有するサンプルのタンパク質濃度を測定。
- Micro BCA Protein Assay – 希釈タンパク質溶液（0.5～20 μg/mL）の総タンパク質濃度を測定。3成分。
簡単、迅速、正確
一部のBCAアッセイにはDilution-Free BSA Protein Standardsが含まれています。この標準液は、マルチチャンネルピペットに対応するよう独自に設計された、7つの希釈済みBSA標準のセットです。
Pierce Dilution-Free standardsは、標準曲線を作成する際の時間と手間のかかる希釈を排除できます。また、米国国立標準技術研究所（NIST）の精製BSAと直接比較して校正されています。
BCAアッセイの原理
BCAベースのタンパク質アッセイの化学
Pierce BCA Protein Assayは、アルカリ媒体中のタンパク質によってCu2+がCu+に還元すること（ビューレット反応としても知られる）と、ビシンコニン酸（BCA）による一価銅イオン（Cu+）の高感度で高選択性の比色検出を組み合わせています。
図1.最初のステップはアルカリ性環境でのタンパク質による銅のキレート化で、これは青色の錯体を形成します。この反応では、酒石酸カリウムナトリウムを含有するアルカリ環境で、3つ以上のアミノ酸残基を含有するペプチドが二価銅イオンと有色キレート錯体を形成します。
単一のアミノ酸とジペプチドはビューレット反応で影響を受けませんが、トリペプチドや高分子のポリペプチドまたはタンパク質は反応して、540 nmの光を吸収する水色～紫色の複合体を形成します。1つの二価銅イオンは、4～6つの近隣のペプチド結合と有色の配位錯体を形成します。生成される色の強度は、反応に関与するペプチド結合の数に比例します。
図2.2番目のステップでは、高感度で選択性の高い比色検出試薬であるBCA試薬が、最初のステップで形成された一価銅陽イオン（Cu+）と反応して紫色を生成します。
BCA／銅錯体は水溶性で、562 nmで強い線形吸光性を示し、タンパク質濃度の増加に比例します。紫色は、550～570 nmの任意の波長で測定でき、シグナルの損失は最小限（10%未満）です。BCA試薬により発生するシグナルは、ビューレット試薬を使用したシグナルよりも約100倍高感度（つまり、より検出限界が低い）です。
Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA protein assayは従来のBCAアッセイと同じ銅還元法を採用していますが、独自の銅キレート剤を使用しています。発色反応の2番目のステップでは、Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCAキレート剤が最初のステップで形成された還元（一価銅）陽イオン（Cu+）と反応し、強い金色の反応産物を生成します。銅錯体は水溶性で、480 nmで強い線形吸光性を示し、タンパク質濃度の増加に比例します。
Dilution-free BCA protein assays
Dilution-free BCA protein standardsは個別に、または他のBCAタンパク質アッセイの一部としてご利用いただけます。Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assayを使用すると、サンプルや標準液を希釈する必要がないため、Bradford AssayまたはPierce BCA Protein assay kitと比較して、アッセイのセットアップを最大80%低減できます。さらに、室温で5分間インキュベートするだけです。希釈不要のBSAタンパク質スタンダードは、BCA Protein Assay Kitwith Dilution-Free BSA Protein Standardsにも含まれています。
図3.Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCAAssayは他のタンパク質アッセイと比較してセットアップ時間を最大80%短縮。アッセイは、メーカーのプロトコルに従って、マイクロプレートフォーマットで実施しました。5つの細胞溶解物および5つの精製タンパク質の、合計10種類のサンプルを準備しました。BCAおよびBradfordアッセイの標準曲線は、2 mg/mLのウシ血清アルブミン（BSA）スタンダードの段階希釈により作成しました。Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Assayの標準曲線は、マルチチャンネルピペット対応のチューブストリップにパッケージされたPierce Dilution-Free BSAProtein Standards（キットに付属）を使用して作成しました。10個のサンプルのうち4つは原液濃度が>2 mg/mLであることが予想されたため、BCAおよびBradfordアッセイ用にはサンプルを希釈するステップが必要でした。一方、Dilution-Free Rapid Gold BCA Assay用にはサンプルを希釈する必要はありませんでした。その後、サンプルを各アッセイのワーキング試薬と混合し、メーカーの説明書に従ってインキュベートしました。
BCAアッセイの利点
BCAタンパク質の定量
BCAアッセイの主な利点の1つは、リニアな検量線を生成できることです。この検量線は、未知のタンパク質濃度の正確な測定を可能にし、他の標準的なアッセイよりも広いダイナミックレンジを提供します。
図4.Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assayは、幅広いダイナミックレンジ（0～10 mg/mL）で検量線を生成。検量線はPierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assayおよび他社の精製BSAを用いて作成しました（0～10 mg/mL）。どちらのアッセイも、メーカーの説明書に従って、マイクロプレートフォーマットで実施しました。吸光度の読み取りにはThermo Scientific Varioskan LUXマルチモードマイクロプレートリーダーを使用しました。
BCAアッセイの正確性
BCAタンパク質アッセイのもう1つの主な利点は、タンパク質間のばらつきが少ないことで示される正確性です。タンパク質はその組成や構造が多様で、一部のアッセイでは、タンパク質のアミノ酸配列、等電点（pI）、二次構造、および側鎖または補欠分子族における違いにより、比色反応にばらつきが生じます。BCAの化学的特性は、存在するペプチド結合の数に比例して発色反応を生じるため、色素結合アッセイ（Bradfordアッセイなど）と比較してこの違いによる影響が少なく、タンパク質間のばらつきが少なくなります。
図5.Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assayおよび他社のBradfordタンパク質アッセイのタンパク質定量結果を既知濃度のサンプルと比較したもの。どちらのアッセイも、各メーカーのプロトコルに従って、マイクロプレートフォーマットで実施しました。Bradfordアッセイでは、5 μLのサンプルを250 μLのBradfordワーキング試薬に添加し、室温で5分間インキュベートしました。Dilution-Free Rapid Gold BCAProtein Assayでは、10 μLのサンプルを200 μLのDilution-Free Rapid Gold BCAワーキング試薬に添加し、室温で5分間インキュベートしました。タンパク質サンプルの既知の濃度は、メーカーの表示濃度に基づいており、280 nmでの吸光度により確認しました。
BCAタンパク質アッセイプロトコル
BCA Protein Assay with Dilution-Free BSA Protein Standards
Pierce BCA Protein Assayは、未知サンプルのタンパク質濃度を検出するのに必要なダイナミックレンジに基づいて、2種類の異なるフォーマットを使用して実施できます。このBCAアッセイは、次の2成分システムを使用して、20～2,000 μg/mLのタンパク質濃度を検出します：試薬A（BCA試薬を含有する炭酸塩バッファー）と試薬B（硫酸銅溶液）。これらを組み合わせると、青リンゴの緑色のワーキング溶液が作製され、タンパク質の存在下で37℃で30分間インキュベートすると紫色に変わります。発色反応は真のエンドポイント反応ではないため、Pierce BCA Protein Assayでは高いプロトコルの柔軟性を得られます。インキュベーション温度を上げることで、アッセイの感度を向上できます。強化されたチューブプロトコル（すなわち、60℃で30分間インキュベート）を使用すると、アッセイのワーキングレンジは5～250 μg/mLになり、より希釈されたサンプルの検出が容易になります。
図6.BCA Protein Assay Kit with Dilution-Free BSA Protein Standards, multichannel pipe compatible protocol.
Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay Kit protocol
Dilution-Free Rapid Gold BCAProtein Assayは、BCAアッセイの高い感度と直線性を実現しますが、わずかな時間で実施できます。BCAワーキング溶液を混合して、サンプルおよびdilution-free standardsをマイクロプレートに添加し、室温で5分間インキュベートして、吸光度を読み取るだけです。
図7.Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay Kit protocol.
Modified Lowry Protein Assay Kit（英語） | |
| アッセイ範囲：マイクロプレート（サンプル量） | 10～1,500 µg/mL （40 µL） |
| アッセイ範囲：キュベット （サンプル量） | 1～1,500 µg/mL （200 µL） |
| 反応時間と温度 | 室温で10分間および30分間 |
| 総アッセイ時間 | 110分 |
| 吸光度測定 | 750 nm |
| 適合する試薬 | SDS（最大1%） |
| 適合しない試薬 | 還元試薬、キレート剤、界面活性剤、トリス、トリシン、グリセロール |
| 均一性 | タンパク質間変動はCoomassie色素法に比べて小さい |
| 製品のサイズ： | 530 mL／キット |
| カタログ番号 | 23240 |
| 関連製品：Pierce Dilution Free BSAProtein Standards, Multichannel Pipette Compatible, 2 mg/mL | |
Lowryアッセイの原則
Pierce Modified LowryProtein Assayは、1951年にOliver H. Lowryが導入した比色法に基づいています。Pierce modified assayは、従来の2つの不安定な試薬をより安定した1つの試薬で置き換えています。
PierceModified Lowry Assayの化学
Pierce Modified Lowry Protein Assayは、銅-キレート化学が関わる、強化ビューレットアッセイです。Pierce Modified Lowry Protein Assayの色形成メカニズムはPierce BCAProtein Assayのそれと似ていますが、2つの方法の間には大きな違いがいくつかあります。Pierce Modified Lowry Protein Assayを使用した色形成の正確なメカニズムは完全には解明されていませんが、反応は2つの独立したステップで起こることが分かっています。まず、タンパク質を室温で10分間インキュベートすると、酒石酸塩の存在下でアルカリ性硫酸銅と反応します。このインキュベーションの間に、4つのペプチド結合と1つの銅原子から四座配位銅錯体が形成され、水色に発色します（これが「ビウレット反応」です）。インキュベーション後、フォリンフェノール試薬を添加します。四座配位銅錯体が電子をリンモリブデン-リンタングステン酸錯体（フォリンフェノール試薬）に移動させる際に色が増強すると考えられています。この反応によって生成される還元リンモリブデン-リンタングステン酸錯体は、濃い青色をしています。
図8.Pierce Modified Lowry Protein Assay Kitの反応の概略図。
図9.Pierce Modified Lowry Protein Assay protocol
マニュアル＆プロトコル
アプリケーション＆テクニカルガイド
その他の資料
リソース
>Pierce Protein methods – タンパク質解析に関する記事の百科事典
Protein assay technical guide – tools and reagents for improved quantitation of total or specific proteins.
Protein assay compatibility table – summarizes compatible substances for several popular protein assays.
Protein Analysis Learning Center – resources for different protein analysis techniques
Protein Biology Application Notes – journal-style articles based on research applications and proof-of-concept experiments
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.