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Recombinant Protein Definition and Information |
A recombinant protein is a manufactured protein that has been produced using cells engineered to carry a gene of interest. Recombinant proteins can have the same amino acid sequence as the corresponding naturally occurring (wild-type) protein, or have their sequence modified for improved properties such as solubility or production yield.
There are myriad applications for recombinants proteins in biomedical research, as well as diagnostics and therapeutics. Recombinant proteins have become an important tool in various areas of science. Laboratory uses for recombinant proteins include:
The above applications require that the recombinant protein be biologically active; that is, the protein is recognized by cells and cause changes in those cells. Bioactivity can be measured in an appropriate cell-based assay and quantified as a specific activity or EC50.
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Non-bioactive recombinant proteins may be used as standards in protein analysis studies including immunoassays such as western blotting, ELISA, gel shift, and immunohistochemistry.
Many biologically important classes of recombinant proteins are available commercially, obviating the need to express, purify, and validate commonly used bioactive recombinant protein(s).
Major types of recombinant proteins include:
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特定のアプリケーションに組み換えタンパク質を選択する際、どのレベルの品質管理と文書化が必要となるかを知ることに役立ちます。
研究グレードの組み換えタンパク質は、細胞モデルの開発、細胞表現型の維持、in vitroアッセイなど、さまざまなライフサイエンス研究のアプリケーションに適しています。
As an additional safeguard against animal pathogen contamination, animal-free recombinant proteins are made using raw materials that are not of animal origin.
GMP-manufactured recombinant proteins undergo extensive testing and are accompanied by documentation to support projects/applications that require this level of rigor.
バイオアッセイは、特定の成長因子またはサイトカインの生物学的活性を測定することを目的としています。ほとんどの場合には、初代細胞や細胞株などのさまざまな指標細胞を用いたセルベースの検査です。一般的に使用されるバイオアッセイには、細胞増殖アッセイ、走化性アッセイ、サイトカイン産生アッセイ、および細胞毒性アッセイがあります。特定のサイトカインの生物学的活性はED50として表され、これは最大反応の50%を誘導するサイトカインの濃度を表しています。
The specific activity of a biologically active protein can be determined using the following equation:
1 x 106 / ED50 (ng/mL) = specific activity (units/mg)
The ED50 (AKA EC50) can be found on the CoA for the recombinant protein, but we advise determining the ED50 of a given recombinant protein in your functional assay system.
For additional information on ED50 and its relationship with specific activity, please refer to our Tech Tip.
まず、容器を遠心分離して、チューブの底部に粉末を濃縮します。一般的に、0.1~1.0 mg/mLの濃度に再構成することをお勧めします。ほとんどのタンパク質は、滅菌蒸留水を添加して再構成できます。ただし、水以外の希釈液が必要な場合には、製品データシートまたはCoAに表示されています。推奨溶液、キャリアタンパク質濃度、および長期保存条件についてもこれらの文章で確認することができます
一般的に、凍結乾燥した組み換えタンパク質は–20℃で保存することをお勧めしますが、短期保存でしたら4℃または室温でも許容できます。再構成したタンパク質溶液の場合は、10 µL以上のタンパク質溶液を含む作業アリコートを作成し、–20℃~–80℃で保存することをお勧めします。ただし凍結融解を何度も繰り返さないでください。凍結乾燥および再構成した組み換えタンパク質の保存に関する製品固有の手順は、製品マニュアル、データシート、または分析証明書(CoA)に記載されています。
組み換えタンパク質は通常、キャリアタンパク質や添加剤(BSA、HSA、sucroseなど)を含まないように調製されています。その結果、凍結乾燥中のタンパク質生成物は、ペレットの代わりに薄く、場合によっては目に見えないほどのフィルムとして、バイアルに堆積することがあります。ペレットのサイズは、バイアル内の組み換えタンパク質の量に直接関係しません。
タンパク質生成物を完全に回収するため、凍結乾燥した組み換えタンパク質のバイアルを開封する前に、キャップに付着したり、バイアル側面から底部かけて溜まったりしているタンパク質を20~30秒間遠心分離して除去しておくことをお勧めします。再構成後は、SDS-PAGEで微量分析することで生成タンパク質の存在を確認できます。一般的に、アクリルアミドのゲルに期待されるサイズのタンパク質バンドはわずか10 ngロードしたタンパク質で可視化できるはずです。
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