高内涵成像分析系统筛选(HCS)和高内涵分析(HCA)示例数据

数据是性能的证明

CellInsight 高内涵筛选平台可提供清晰、详细的出版级图像和定量数据。查看用于血管新生、凋亡、自噬、细胞周期和增殖、内吞及活力等生命科学应用的荧光图像、图形和视频示例应用。浏览我们的抗体和测定。请记得查看下面的图片库。 

应用示例

Thermo Scientific CellInsight 高内涵平台使您可在整个荧光光谱范围内优化检测 - 并多重分析组分以深入探索生物学问题。为此，我们拥有许多与 CellInsight 系统兼容的抗体和检测方法。以下是将检测试剂盒与高内涵平台配合使用的综合应用列表。

此检测能够可靠、自动识别由内皮细胞形成的血管生成管（微毛细管），并进行与血管生成管形成相关的定量测量，如血管数量、其形态和分支以及血管生成指数。

 

自动测量的属性： 

  • % 连接管
  • 连接管平均面积
  • 连接管平均宽度
  • 连接管平均节点间距
  • 血管生成指数

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场或共焦
  • 5 倍放大

实验方案和试剂：

在 Matrigel 基底胶中生长并经血管生成化合物处理和 5 倍放大成像的 HUVEC 细胞。 

 

（左） 细胞核用 Invitrogen 分子探针  Hoechst 33342  （显示为红色）染色，细胞骨架（肌动蛋白纤维）用鬼笔环肽偶联物（显示为绿色 / 黄色； 标记物选择广泛）染色。 （右） 使用 Thermo Scientific HCS Studio 软件识别的血管新生特征。在双通道检测中，连接管通过蓝色叠加自动识别，而分支节点显示为粉红色点。多个参数可在额外的检测通道中自动测量，并与识别的管结构相关联。

苏拉明是血管新生的强效抑制剂。

苏拉明浓度的剂量依赖反应可基于通过 Thermo Scientific HCS 平台和 Thermo Scientific HCS Studio 软件自动测量的多个属性使用 GraphPad Prism 软件绘制。

高内涵筛选(HCS)的半胱天冬酶检测可在活细胞或固定细胞中轻松地实时检测活性半胱天冬酶。

 

自动测量的属性： 

  • 不同细胞区域中点的荧光强度、形态和计数值
  • 每个细胞不同区域间荧光强度平均的差异和比值
  • 每个细胞不同区域内通道间的强度和计数比

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场或共焦
  • 10 或 20 倍放大

实验方案和试剂：

用石硫合剂处理 Hap1 细胞 后，用 CellEvent Caspase-3/7 Green 试剂 和  Hoechst 33342 进行标记。 细胞成像采用  Thermo Scientific CellInsight CX5 高内涵平台 （行 A）和可自动识别并量化每个细胞 CellROX 绿色荧光强度的  Thermo Scientific HCS Studio 软件（行 B）。

通过半胱天冬酶 3/7 活化指示的细胞凋亡诱导的剂量依赖增加。 比较了两种细胞类型的敏感性：野生型 Hap1 （红色）和缺少 ATG5 的 Hap1（蓝色）。

该检测使用细胞核染色剂鉴定细胞，并通过 TUNEL 标记测量 DNA 链断裂。Invitrogen Click-iT TUNEL Alexa Fluor 成像检测试剂盒快速高效，即使在处理大量凋亡细胞时也可提供精确的定量数据。此试剂盒针对高内涵筛选(HCS)优化，并提供三种波长选项，可与其他细胞检测同时进行。

 

自动测量的属性： 

  • 各对象的荧光强度、形态和计数值
  • 不同细胞区域中点的荧光强度、形态和计数值
  • 每个细胞不同区域间荧光强度平均的差异和比值
  • 每个细胞不同区域内通道间的强度和计数比

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场或共焦
  • 20 倍放大

实验方案和试剂：

经过诱导细胞凋亡处理后成像的 HeLa 细胞。 使用  Invitrogen 分子探针  Click-iT TUNEL Alexa Fluor 594 成像检测（用于显微镜 & HCS） 和 Invitrogen 分子探针  Hoechst 33342 染色后的未经处理 （左） 和经星形孢菌素处理后 （右） 的 HeLa 细胞.细胞使用 Thermo Scientific HCS 成像，并使用 Thermo Scientific HCS Studio 软件测定荧光强度和计数比。

使用 Invitrogen 分子探针 Click-iT TUNEL Alexa Fluor 647 检测细胞凋亡的多种化合物和细胞类型的剂量响应图。使用 Thermo Scientific HCS 平台以及 Thermo Scientific HCS Studio 2.0 细胞分析软件自动测量响应，并使用 GraphPad Prism 软件绘图。

本检测中，使用基于免疫荧光检测的固定终点检测法定量分析自噬囊泡上的 LC3B 蛋白。细胞通过细胞核染料鉴别，并测量了各细胞相关的 LC3B 表达。

 

自动测量的属性： 

  • 各对象的荧光强度、形态和计数值
  • 不同细胞区域中点的荧光强度、形态和计数值
  • 每个细胞不同区域间荧光强度平均的差异和比值
  • 每个细胞不同区域内通道间的强度和计数比

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场
  • 20 倍放大

实验方案和试剂：

经处理以诱导自噬后成像的 A549 细胞

经处理以诱导自噬后成像的 A549 细胞。（左） A549 细胞经氯喹处理并使用 Invitrogen Hoechst 33342、Invitrogen HCS CellMask Deep Red 和 Invitrogen Alexa Fluor 488 山羊抗兔抗体的抗 LC3B 染色。细胞会在高氯喹浓度下累积 LC3B。 （右） 使用 Thermo Scientific CellInsight CX5 高内涵平台和 Thermo Scientific HCS Studio 软件自动识别的自噬功能：细胞核（蓝色）、细胞（绿边界）。LC3B 通过颗粒计数（粉色）和检测 488 通道中的荧光强度分析。

提高氯喹浓度时各 LC3B 颗粒的剂量响应图。

提高氯喹浓度时 LC3B 荧光强度的剂量响应图。

细胞周期分析和有丝分裂指数测量可用于深入分析细胞分裂，并定量分析影响有丝分裂进程的化合物或处理的效应。自动检测可以测定细胞 DNA 含量，以指示染色细胞在细胞周期中的位置。或者，您可检测与有丝分裂相关的蛋白质水平，例如组蛋白 H3。

 

自动测量的属性： 

  • DNA 含量
  • 最多 3 个二级靶标的强度水平
  • 单细胞和群体水平上的相关性

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场
  • 10 倍放大

实验方案和试剂：

细胞周期检测。 A549 细胞采用递增剂量的有丝分裂抑制剂处理 24 小时。细胞经磷酸化组蛋白 H3 染色后，使用 Invitrogen Alexa Fluor 488 二抗进行检测。Invitrogen  HCS NuclearMask Deep Red 染料 用作细胞核分割工具。

使用 GraphPad Prism 软件进行非线性回归确定 EC₅₀ 后 A549 细胞中有丝分裂抑制剂的剂量依赖响应图。

此自动检测基于将核苷类似物 EdU 掺入 DNA 以测量新 DNA 合成。铜催化的“点击”反应将荧光染料 Invitrogen Alexa Fluor 染料结合物掺入 EdU 并可在一系列波长选择下轻松进行多重检测。

 

自动测量的属性： 

  • DNA 含量
  • 最多 3 个二级靶标的强度水平
  • 单细胞和群体水平上的相关性

成像方式： 

  • 总细胞
  • 复制细胞

实验方案和试剂：

A549 细胞增殖检测。 A549 细胞使用递增剂量的紫杉醇剂处理。使用 Invitrogen Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647 成像试剂盒 （红色）和 Invitrogen  Hoechst 33342 染料 （蓝色）染色细胞。细胞使用 Thermo Scientific CellInsight CX7 高内涵分析平台成像，并使用 Thermo Scientific HCS Studio 软件计数总细胞和复制细胞。

 

经提高增殖抑制剂浓度处理并使用  Invitrogen 分子探针 Alexa Fluor 647 染料染色的 U2OS 细胞的剂量响应图。

此检测自动测量反映细胞内基本结构变化的细胞形态的改变。具体来说、检测中测量了整个细胞和细胞核的形态以及 F 肌动蛋白和微管纤维的数量、尺寸、胞内位置和排列。

 

自动测量的属性： 

  • 整个细胞的形状和尺寸
  • 细胞骨架纤维的数量、尺寸和排列
  • 细胞骨架标记物的胞内排列、位置和纹理测量

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台 - 第二张图像采用 CX7 平台成像
  • 宽场，20 或 40 倍放大

实验方案和试剂：

细胞骨架重排检测。 A549 细胞经细胞松弛素 D 处理并使用 Thermo Scientific CellInsight CX7 高内涵分析平台分析。细胞核使用 Invitrogen HCS NuclearMask 蓝色染料 标记，而 F- 肌动蛋白使用 Invitrogen Alexa Fluor 488 鬼笔环肽标记。整个细胞使用 Invitrogen  HCS CellMask Deep Red 染料区分。检测中自动分割细胞（黄色叠加）并识别肌动蛋白纤维的位置和方向（绿色叠加）。识别和标记超过阈值长度的肌动蛋白纤维（红色叠加）。条形图和散点图中可识别单个细胞。

细胞对于细胞松弛素的响应基于细胞面积、细胞核强度、肌动蛋白纤维计数、微管蛋白纤维计数和肌动蛋白纤维强度显示。

HCS DNA 损伤试剂盒使用二抗偶联物检测磷酸化的 H2AX，使用 Image-iT DEAD Green 染料检测细胞毒性，并使用 Hoechst 33342 标记活细胞和死细胞中的细胞核。

 

自动测量的属性： 

  • 整个细胞的形状和尺寸
  • 细胞骨架纤维的数量、尺寸和排列
  • 细胞骨架标记物的胞内排列、位置和纹理测量

成像方式： 

  • DNA 损伤
  • 细胞毒性

实验方案和试剂：

研究人员可使用 HCS DNA 损伤试剂盒检测与定量 DNA 损伤和细胞渗透性变化。

内吞作用参与许多细胞过程，如营养获取和受体信号传导。分析特定分子的内化程度可指示内吞作用。常用标记物包括 LDL、EGF 或转铁蛋白等配体以及偶联至荧光基团以指示其位置的 10,000 MW 右旋糖等液相标记物。

 

自动测量的属性： 

  • 各对象的荧光强度、形态和计数值
  • 不同细胞区域中点的荧光强度、形态和计数值
  • 每个细胞不同区域间荧光强度平均的差异和比值
  • 每个细胞不同区域内通道间的强度和计数比

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台 - 第二张图像采用 CX5 平台成像
  • 宽场或共焦
  • 20 倍放大

实验方案和试剂：

稳定表达一种 GFP-EGF 受体构建体并经  pHrodo 红色 EGF 偶联物 培养的 U2OS 细胞经 PitStop 2 抑制剂 (Abcam, Inc.) 处理以抑制内吞作用。 细胞使用 Invitrogen Hoechst 33342 和  pHrodo 红色 EGF 偶联物染色。染色后的细胞使用  Thermo Scientific CellInsight CX5 高内涵平台 （行 A）成像并使用  HCS Studio 软件分析。内化的 EGF 受体和 EGF 配体为自动鉴定（行 B）：细胞核（蓝色）、细胞（绿色边界）和 EGF 或 EGF 受体均通过颗粒计数（pHrodo EGF 为红色，或 GFP 受体为绿色）检测。

U2OS 细胞中增加 Pitney Bowes 2 抑制剂 (Abcam, Inc.) 浓度后 EGF 受体（绿色轨迹）和 EGF 内化（红色轨迹）的依赖性损失。 在高浓度 Pitney 2 抑制剂下，细胞无法内化 EGF 受体及其配体。

HCS LipidTOX 中性脂质染料可用于成像法高内涵筛选（HCS）检测，可表征化合物对哺乳动物细胞系中脂质代谢的潜在毒副作用。LipidTOX 系列检测试剂盒包括用于固定细胞的中性脂质染料和用于活细胞的磷脂染料，两者可在多重分析中组合使用。

 

自动测量的属性： 

  • 不同细胞区域中点的荧光强度、形态和计数值

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台

实验方案和试剂：

  • 请查看下方选择指南表

经  LipidTOX 绿色中性脂质染料 染色并用 Hoechst 33342 复染后可视化的骨髓来源 hMSC 中的脂质囊泡

脂肪变性/脂肪生成

  HCS LipidTOX 深红色中性脂质染料，用于细胞成像HCS LipidTOX 红色中性脂质染料，用于细胞成像HCS LipidTOX 绿色中性脂质染料，用于细胞成像
结果对固定细胞中的中性脂滴具有高度亲和力
常用滤光片组Cy5Texas RedFITC
报告底物LipidTOX 深红色中性脂质染料LipidTOX 红色中性脂质染料LipidTOX 绿色中性脂质染料
激发/发射波长(nm)637/655577/609495/505
兼容活细胞否
添加到生长培养基否
可用甲醛固定固定后标记细胞
多色标记可结合磷脂沉积检测试剂进行多重分析（参见下表）
检测平台显微镜成像，HCS
参考文献引用文献
产品规格125 μL（用于脂肪变性时为 1,200 次/用于脂肪生成时为 240 次）
货号 H34477H34476H34475

脂肪变性/磷脂沉积

  HCS LipidTOX 磷脂沉积和脂肪变性检测试剂盒HCS LipidTOX 磷脂沉积和脂肪变性检测试剂盒
结果连续分析磷脂沉积和脂肪变性的试剂盒
常用滤光片组Texas RedFITC
报告底物LipidTOX 红色磷脂染料LipidTOX 绿色中性脂质染料
激发/发射波长(nm)595/615495/505
兼容活细胞是否
添加到生长培养基是否
可用甲醛固定是固定后标记
多色标记可结合其他检测试剂盒用于 HCS
参考文献引用文献
检测平台显微镜成像，HCS
产品规格2 板/240 次10 板/1,200 次
货号H34157H34158

磷脂沉积/脂肪生成

  HCS LipidTOX 绿色磷脂沉积检测试剂HCS LipidTOX 红色磷脂沉积检测试剂
结果使用活细胞培养后的标记磷脂积聚情况
常用滤光片组FITCTexas Red
报告底物LipidTOX 绿色磷脂染料LipidTOX 红色磷脂染料
激发/发射波长(nm)495/525595/615
兼容活细胞是
添加到生长培养基是
可用甲醛固定是
多色标记可结合中性脂质染色剂进行多重分析（见上表）
参考文献引用文献
检测平台显微镜成像，HCS
产品规格125 μL（1,200 次检测）
货号H34350H34351

此自动检测使用 Invitrogen MitoTracker Orange 作为线粒体功能指标，这是因为其在活细胞线粒体中的累积与线粒体膜电位成正比。Invitrogen Hoechst 33342 可作为鉴定细胞的分割工具；可轻松结合 Invitrogen Image-iT DEAD Green 细胞活力染料等活性染料以进一步进行多重检测。这三种染料在甲醛固定和洗涤剂渗透等方面有足够的荧光信号强度保留，可用于固定终点检测以及用于检测特定蛋白的免疫细胞化学应用。

 

自动测量的属性： 

  • 线粒体膜电位
  • 细胞活性
  • 核形状和尺寸

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场
  • 10 或 20 倍放大

实验方案和试剂：

 Hoechst 33342  染色以进行核分割后的 HepG2，可自动完成细胞计数和细胞核形态分析。

Image-IT DEAD Green 染料 可用于标记死细胞，并基于细胞膜通透性确定细胞活力。

MitoTracker Orang 可标记带极化膜的线粒体，其信号强度与膜电位和线粒体健康情况成比例。

经提高缬氨霉素浓度处理的 HepG2 细胞的剂量响应图。 细胞使用 Invitrogen MitoTracker Orango ETO  染色以测量线粒体膜电位，使用 Invitrogen Hoechst 33342  染料以基于核强度进行总细胞计数，以及使用 Invitrogen Image-iT DEAD Green 鉴别死细胞。自动成像和分析使用 Thermo Scientific HCS 平台完成。使用 GraphPad Prism 软件基于数据计算 EC50  值后测量细胞损失、线粒体膜电位和膜通透性。

此自动检测支持神经元和神经突起形态的定量和关联。分析范围可从神经突起生长测量等简单分析到扩展神经突起生长和分支等复杂分析。

 

自动测量的属性： 

  • 细胞计数
  • 细胞大小
  • 神经突起计数
  • 神经突起长度
  • 神经突起分支
  • 因分析在图像采集过程中进行，所以可采集经优化的数据集以确保选定神经元的数量能满足您的统计需求。

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场或共焦
  • 10 倍放大

实验方案和试剂：

原代神经元生长测定。（右） 海马体原代神经元制备物采用 Invitrogen Hoechst 33342 （蓝色）和 Alexa Fluor 647 免疫偶联物标记。 （右） 神经突起的生长使用 Thermo Scientific HCS Studio 软件自动鉴别。细胞体由蓝色标记。神经元由绿色标记。

剂量响应图中通过神经元数、轴突计数、轴突长度和轴突强度等自动测量结果显示了谷氨酸和钾盐镁矾浓度对大鼠海马神经元的影响。

使用 CellROX 染料等荧光报告基因可实时分析活细胞和固定细胞制备物中 ROS 的生成。

 

自动测量的属性： 

  • 各对象的荧光强度、形态和计数值
  • 不同细胞区域中点的荧光强度、形态和计数值
  • 每个细胞不同区域间荧光强度平均的差异和比值
  • 每个细胞不同区域内通道间的强度和计数比

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台 - 第二张图像采用 CX5 平台成像
  • 宽场或共焦
  • 10 或 20 倍放大

实验方案和试剂：

HAP1 细胞用甲萘醌处理并使用  CellROX Green  和 Hoechst 33342 标记。 细胞成像采用  Thermo Scientific CellInsight CX5 高内涵平台 （行 A）和可自动识别并量化每个细胞 CellROX 绿色荧光强度的  Thermo Scientific HCS Studio 软件（行 B）。

使用  CellROX Green  染色并经甲萘醌处理 1 小时的 Hap 1 细胞中 ROS 生成的剂量依赖增加。

Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 蛋白合成检测试剂盒提供快速、灵敏地检测 HCS 格式蛋白质合成的方法。此检测在含 O 丙氨酸的完全培养基中可高效地将 O- 甲基嘌呤霉素 (OPP) 整合到新翻译的蛋白质中。然后，用亮色光稳定 Alexa Fluor 染料通过快速、高度特异性的温和 Click 反应进行荧光标记。

 

自动测量的属性： 

  • 各对象的荧光强度、形态和计数值
  • 不同细胞区域中点的荧光强度、形态和计数值
  • 每个细胞不同区域间荧光强度平均的差异和比值
  • 每个细胞不同区域内通道间的强度和计数比

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台 - 第二张图像采用 CX5 平台成像
  • 宽场或共焦
  • 10 或 20 倍放大

实验方案和试剂：

经环己酰亚胺处理并在用  Hoechst 33342  和 Click-iT OPP 标记后添加用于化学选择性检测的 Alexa Fluor 488 叠氮化物（Click-iT Plus OPP Alexa Fluor 488 蛋白质合成检测试剂盒）的 HAP1 细胞。 细胞成像采用  Thermo Scientific CellInsight CX5 高内涵平台 CellInsight CX5 高内涵平台 （行 A）和可自动识别并量化每个细胞 Click-iT OPP 绿色荧光强度的  Thermo Scientific HCS Studio 软件成像细胞（行 B）。

在使用环己酰亚胺处理细胞后，蛋白质合成中的剂量依赖性下降。 比较了两种细胞类型的敏感性：野生型 Hap1 （红色）和缺少 ATG5 的 Hap1（蓝色）。

此自动化检测监测多能干细胞 (PSC) 向中胚层的转化，然后采用固定细胞成像方案研究定向心肌细胞表型。在 3 通道检测中，使用细胞核染料固定并染色细胞以定位，并利用多能性 (Oct4) 以及心脏细胞分化 (Nkx2.5) 相关核转录因子的一抗。

 

自动测量的属性： 

  • NuclearMask 鉴别
  • 按通道鉴别和定位的点

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场
  • 10 倍放大

实验方案和试剂：

使用 Oct4 （绿色）和 NKx2.5 （红色）进行免疫荧光检测以确定经 DAPI （蓝色）染色的 H9 细胞的分化状态。

鉴定分化的干细胞。 使用 DAPI 染色自动生成核掩蔽（蓝色轮廓），然后以红色突出显示核区域内分化标记物（本例中为 Oct4）阳性的细胞。

干细胞分化检测结果。 在所示时间点固定的细胞中，量化 Oct4+  和 Nkx2.5+  细胞核的百分比。分化前（第 0 天），几乎 100% 的所有细胞都是 Oct4+/Nkx2.5-，与多能状态一致。第 6 天，90% 以上已分析细胞的两种标记物均为阳性。第 6 天后，Oct4+  细胞频率下降，与多能性丧失以及向最终分化心肌细胞表型的转化相一致。

此自动检测通过同时定位突触前和突触后标记物以鉴别突触，并将其与神经元和神经突形态相关联。

 

自动测量的属性： 

  • 神经突起计数
  • 神经突起长度
  • 神经突起分支
  • 突触前囊泡
  • 突触后点
  • 突触数
  • 因分析在图像采集过程中进行，所以可采集经优化的数据集以确保选定神经元的数量能满足您的统计需求。

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场或共焦
  • 20 倍放大

实验方案和试剂：

突触发生检测。（左） 海马体原代神经元制备物采用 Invitrogen  Hoechst 33342 染料  （蓝色）和 Invitrogen Alexa Fluor 488 MAP2 抗体偶联物标记。 （中、右） 使用 Thermo Scientific HCS Studio 软件自动鉴别突触发生特征。细胞体由蓝色标记。点由粉红色标记。神经突由绿色标记，而点和神经突之间的重叠由黄色标记。

剂量响应图中通过突触前强度、突触后强度、囊泡计数和突触计数等自动测量结果显示了谷氨酸和钾盐镁矾浓度对大鼠海马神经元的影响。

此自动化检测中，将自动检测和定量各细胞中活化转录因子从细胞质到细胞核中的转移。此检测使用细胞核染料、整个细胞染料以及转录因子的特异性标记物等三个检测通道方便地运行。

 

自动测量的属性： 

  • 细胞质和细胞核中转录因子的强度
  • 细胞质和细胞核间转录因子强度的差异，以细胞质到细胞核的转位衡量
  • 细胞质和细胞核间转录因子强度的比例，以细胞质到细胞核的转位衡量
  • 孔中在一个或多个靶点上高于用户可定义细胞核与细胞质强度差异或比值阈值细胞的百分比
  • 核形状和尺寸

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场
  • 10 或 20 倍放大

实验方案和试剂：

转录因子的激活（左） HeLa 细胞经 TNFα 处理、固定、渗透和 Invitrogen HCS NuclearMask Blue （蓝色）染色。 NFκB  通过间接免疫荧光（绿色）标记。 （右）  使用 Thermo Scientific HCS Studio 软件自动检测细胞特征：细胞核（蓝色叠加）、细胞质（绿色叠加）和 NFκB 强度。红色叠加显示了无转位的细胞。

NFκB 细胞质与细胞核强度的差异与比值。 自动计算和绘制细胞质和细胞核间 NFκB 强度的差异。NFκB 细胞质与细胞核强度的差异与比值散点图中的的红色点对应于不表现 NFκB 转位的细胞。

显示通过提高 TNFα 浓度活化 NFkB 的剂量响应图。 Y 轴显示细胞核（含转位后的 NFkB）和周围细胞质（含未转位的 NFkB）间的强度差异，用于指示 NFkB 转位。

膜完整性是细胞活力检测中的常用测量参数。胞膜受损的细胞能够可透过非细胞透性的 DNA 结合染料，而此 DNA 染色则可作为细胞死亡指标，用作单通道检测的基础。Invitrogen Image-iT DEAD Green 细胞活力染料（绿色；货号I10291）是一种理想的死细胞染色剂，可标记死细胞的细胞核，还可耐受固定和渗透过程，因此可与其他技术轻松多重使用。

 

自动测量的属性： 

  • 单通道
  • 双通道
  • 总细胞
  • 活细胞
  • 死细胞

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台
  • 宽场
  • 10 倍放大

实验方案和试剂：

多重单通道细胞活力检测。 HeLa 细胞经喜树碱处理并用 Invitrogen Hoechst 33342 （蓝色通道）染色以进行总细胞计数。死细胞用 Invitrogen Image-iT DEAD Green （绿色通道）染色。增殖细胞用 Invitrogen  Click-iT Plus EdU 及 Invitrogen Alexa Fluor 647 吡啶叠氮化物 （深红色通道）标记。

双通道细胞活力检测。 A549 细胞经不同浓度的喜树碱处理并使用 Invitrogen LIVE/DEAD 细胞成像试剂盒标记。活细胞会隔离 LIVE Green 探针，而死细胞可透过 DEAD Red 染料。细胞经 Invitrogen  Hoechst 33342 复染以进行总细胞计数。

多重单通道细胞活力检测。 经喜树碱处理病用 Invitrogen  Image-iT DEAD Green  染色和使用 Thermo Scientific CellInsight CX5 高内涵筛选平台测定的 HeLa 细胞的剂量响应曲线

双通道活力检测。 显示使用 Invitrogen LIVE/DEAD 细胞成像试剂盒测量的喜树碱浓度对细胞活力影响的剂量响应图。

图像分割将  分析无关的背景或其他特征与感兴趣对象（细胞）相分离，并允许在其适当的空间背景中确定感兴趣对象，如生物标记物转位 至细胞核 或特定细胞分区中生物标记物水平  的变化。图像分割的关键方法包括使用选择性荧光染色剂区分细胞核、细胞质、细胞膜或其他细胞器等细胞的特定区域以描绘整个细胞。

 

自动测量的属性： 

  • 细胞核
  • 细胞质
  • 细胞膜
  • 细胞器

成像方式： 

  • CellInsight CX5 和 CX7 平台 
  • 宽场
  • 10 倍放大

试剂

图 2.使用  HCS CellMask Blue 染料测定的细胞松弛素 D 处理对于 HeLa 细胞大小的影响。 HeLa 细胞在固定和透化前经 DMSO 载体（左）或 10 μM 细胞松弛素 D （右）处理 3 小时。然后用  HCS CellMask Blue 染料和 Alexa Fluor 488 染料偶联鬼笔环肽 标记样品以可视化丝状肌动蛋白（红色）、小鼠抗 α - 微管蛋白 IgG （使用  Alexa Fluor 555 山羊抗小鼠 IgG ，绿色）和 TO-PRO-3 碘化物 复染细胞核（洋红色）。条形图代表使用 HCS CellMask Blue 染料确定的细胞大小定量测量结果以显示细胞松弛素 D 处理的效应。

图 3. 使用 CellMask Deep Red 细胞膜染料对活细胞分割后的细胞膜图像。 HaCaT 细胞（一种永生人角质形成细胞系）使用线粒体靶向 eGFP （绿色伪影）构建体转染后，使用 1 µM Hoechst 33342 （蓝色伪影）和 8 μg⁄mL  CellMask Deep Red 细胞膜染料 （红色伪影）培养。细胞使用 Zeiss Cell Observer HS 显微镜成像。使用 200 nm TetraSpeck 荧光微球采集的图像栈采用 Zeiss AxioVision 3D 解卷积模块的点扩散功能解卷积。图像由德国洪堡萨尔兰大学生物物理系的 Christian Junker 提供。

高内涵抗体和检测

了解有关用于细胞活性、增殖和功能 的试剂或确定细胞结构试剂的更多信息。

对于特异性更高的一抗或二抗，请使用以下链接进行选择：

图库

通过 CellInsight CX7 LZR 平台采集的图像

使用新的 CellInsight CX7 Pro 平台实现高通量免疫检测筛选

 

CellInsight CX7 和 CX7 Pro 仪器之间 FirePlex™-HT 免清洗免疫检测的比较。根据制造商每孔可检测5种和10种分析物的方案，进行了针对高通量筛选的优化免清洗 FirePlex 检测。对10点标准曲线进行定量，以测定分析物的重现性和动态范围窗口。生成的检测可使用 CellInsight CX7 (左图像) 或 CX7 Pro (右图像) 平台进行测量，并使用 FirePlex Analysis Workbench 软件进行定量。只有 CX7 Pro 仪器 (右图) 能够超过2.5(15位)或3.0(16位)的动态范围且不到 15% 的板内 CV。CX7 Pro 仪器出色的光学系统和 95% 的 QE 检测能力显著改善了动态范围和可重现性的性能表现。使用15位和16位 CX7 Pro sCMOS 相机模式的 Abcam™ 对此实验进行了验证，以了解高通量筛选的相关考虑。

免疫肿瘤学应用： 乳腺癌球状体中抗体依赖细胞杀伤的成像

 

乳腺癌球状体中抗体依赖的细胞杀伤。 通过  Dynabeads Untouched 人 NK 细胞试剂盒 分离的人天然杀伤细胞使用  CellTracker Deep Red 染料标记。在 Nunclon Sphera 96 孔板中隔夜培养人乳腺癌细胞 (SKBR3) 以形成球状体，用 HER2 抗体 Trastzumab 处理，然后用 NK 细胞攻击 4 小时。使用  CellEvent 半胱天冬酶-3/7 绿色荧光检测试剂 和 Hoechst 33342 染色细胞，并在 CellInsight CX7 LZR 高内涵筛选平台上成像。图像是多个 Z 切片的最大强度投影。CellEvent 半胱天冬酶-3/7 绿色荧光检测试剂可用于研究球状体中的 NK 细胞和抗体介导的细胞凋亡。CellTracker 深红染料用于追踪球状体内的 NK 细胞。与 SKBR3 细胞上 HER2 结合的 Trastzumab，通过抗体依赖性细胞凋亡扩大 NK 细胞的抗肿瘤反应。

球状体成像和分析应用：EdU 增殖和球状体大小的分割和定量

 

使用 CellInsight CX7 LZR 系统进行 EdU 分割和定量与确定球状体大小。 以 5,000 个细胞 / 孔的密度将 A549 细胞接种到 Nunclon Sphera 96U 孔微孔板上，并在 CO2 培养箱中培养 24 小时。添加 EdU 到 10 μM 的最终浓度并培养 1 小时。然后用 4% 甲醛洗涤和固定球状体，并用 0.25% 的 Triton X-100 渗透。然后用  Click-iT EdU Alexa Fluor 488 HCS 检测试剂盒 按使用说明染色球状体以显示 EdU。在 CellInsight CX7 LZR 高内涵筛选平台上，以共焦模式在 4x 物镜下对板成像。图像是 200 个光学 z- 切片（每个 1 微米）的最大强度投影。定量采用 HCS Studio 2.0 软件的 Morphology Explorer 生物应用进行。将球状体分割为一个对象，并按球状体内点计数 EdU 阳性细胞。使用 Morphology Explorer 生物应用将球状体分割为一个对象，并对球状体内的 EdU 阳性细胞分割，然后绘制细胞数。

用于生物应用的活细胞模式下 3D 球状体的共焦成像

 

活细胞模式下 3D 球状体的共焦成像。 (A) 以 5,000 个细胞 / 孔的密度将 A549 细胞接种在 U 形底微孔板上，并在 CO2 培养箱中培养 48 小时。用 LIVE/DEAD 细胞活力/ 细胞毒性试剂盒标记活球状体的活细胞和死细胞。在 CellInsight CX7 LZR HCS 仪器上的共聚焦模式下使用 10 倍物镜对板自动成像。图像是多个 Z 切片的最大强度投影。球状体核心观察到死细胞（红色），并在外周观察到活细胞（绿色）。 (B) 以 5,000 个细胞 / 孔的密度将 A549 细胞接种在 U 形底微孔板上，并在 CO2 培养箱中培养 24 小时。然后使用  MitoTracker Orange CMTMRos  和  CellEvent 半胱天冬酶-3/7 绿色荧光检测试剂 对活球状体染色 30 分钟。在 CellInsight CX7 LZR HCS 仪器上的共聚焦模式下使用 10 倍物镜对板自动成像。图像是多个 Z 切片的最大强度投影。在 A549 活球状体中，MitoTracker Orange 染色显示大部分细胞健康，并观察到极少数凋亡细胞。 (C) 以 5,000 个细胞 / 孔的密度将 A549 细胞接种在 U 形底微孔板上，并在 CO2 培养箱中培养 24 小时。然后用  Image-iT 绿色低氧试剂 对活球状体染色 30 分钟。在 CellInsight CX7 LZR HCS 仪器上的共聚焦模式下使用 10 倍物镜对板自动成像。图像是多个 Z 切片的最大强度投影。活 A549 球状体在使用 Image-iT 绿色低氧试剂染色后显示出低氧染色。 (D) 以 5,000 个细胞 / 孔的密度将 SKBR3 细胞接种在 U 形底微孔板上，并在 CO2 培养箱中培养 24 小时。然后将活球状体与 pHrodo 红偶联的 Herceptin 抗体培养 24 小时。在 CellInsight CX7 LZR HCS 仪器上的共聚焦模式下使用 4 倍物镜对板自动成像。图像是多个 Z 切片的最大强度投影。胞内囊泡中观察到内化的 pHrodo 红偶联的 Herceptin 抗体。 (E) 使用  Neurobasal Plus 培养基 及 Culture One 添加剂从神经干细胞 (NSC) 中分化神经球。然后用 微管蛋白Tubulin Tracker Deep Red  染色活神经球 1 小时。在 CellInsight CX7 LZR HCS 仪器上的共聚焦模式下使用 4 倍物镜对板自动成像。图像是多个 Z 切片的最大强度投影。微管蛋白 Tracker Deep Red 染色从 NSC 分化的神经球中的神经突。 (F) 以5,000个细胞/孔的密度将 HeLa 细胞接种在 U 形底微孔板上，并在 CO2 培养箱中培养24小时。使用  CellTracker Deep Red 标记已活化的 T 细胞，且在每孔中加入约 5,000 个细胞。培养活化 T 细胞 2 小时后，使用  pHrodo Green AM 胞内 pH 指示剂 染色球状体 30 分钟。然后用 PBS 洗涤细胞 3 次，并在 CellInsight CX7 LZR HCS 仪器上的共聚焦模式下使用 4 倍物镜成像。图像是多个 Z 切片的最大强度投影。添加活化 T 细胞后，胞内 pHrodo Green AM 荧光增加。

球状体内增殖细胞的成像和分析

 

分析 HeLa 球状体中的增殖细胞。 以 5,000 个细胞 / 孔的密度将 HeLa 细胞接种在 Nunclon Sphera U 形底微孔板上，并在 CO2 培养箱中培养 24 小时。球状体用 50 μM 羟基尿素处理 24 小时然后用 10 µm 5- 乙炔基 -2 '- 脱氧尿苷 (EdU) 脉冲洗涤球状体 30 分钟。然后用 PBS 洗涤球状体，并使用  Click-iT EdU Alexa Fluor 488 HCS 检测试剂盒染色增殖细胞。然后用与 Alexa Fluor 647 染料偶联的 Ki67 抗体洗涤并染色球状体。在 CellInsight CX7 LZR HCS 仪器上的共聚焦模式下使用 10 倍物镜对球状体自动成像。图像是多个 Z 切片的最大强度投影。将球状体分割为一个对象，并定量球状体内的 EdU 和 Ki67 阳性细胞点。对照球状体中均可见 EdU 和 Ki67 阳性细胞。羟基脲处理球状体中，活跃增殖的 s 相细胞消失（ EdU 阴性），仅观察到 Ki67 阳性细胞。

免疫肿瘤学应用：T 细胞穿透和杀死肺癌球状体的成像

 

T 细胞穿透和杀死肺癌球状体。 在使用 Gibco 最小必需培养基 (MEM) 的 Nunclon Sphera U 型底板中接种 A549 细胞，并培养 2 天。使用  Dynabeads 人 T-Expander CD3/CD28  活化从人 PBMC 中分离的 T 细胞 72 小时，并用 CellTracker Deep Red 染料 标记 4 小时，然后添加到加入肺癌球状体中。使用  CellEvent 半胱天冬酶 3/7 试剂标记细胞。在 CellInsight CX7 LZR 高内涵平台上，通过活细胞全球状体成像评估 T 细胞渗透和肿瘤细胞毒性。使用 CellEvent 半胱天冬酶 3/7 试剂（绿色）增强染色后，可见活化 T 细胞穿透球状体（红色）并在整个球状体中的靶细胞内诱导细胞凋亡。

参考文献

Thermo Scientific 高内涵分析仪器在高质量科学文献中得到广泛引用。请在此查看同行评审出版物中 HCA 仪器的引用。HCA 是一个强大的荧光显微镜术、图像处理、自动细胞测量及信息学工具组合，可支持基础研究的基础发现以及药物化合物的发现。了解您的同行如何使用 Thermo Scientific CellInsight 高内涵筛选 (HCS) 平台发表其成果。

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仅供科研使用。不可用于诊断程序。