β-ガラクトシダーゼ活性用のマイクロプレートアッセイ

β-D-ガラクトシダーゼをコードする大腸菌lacZ遺伝子は、組換え融合遺伝子発現の検出や哺乳類、酵母および細菌細胞のトランスフェクション効率のモニタリングのためのレポーター遺伝子として、広範囲に用いられています。哺乳動物細胞にはβ-ガラクトシダーゼが含まれるにもかかわらず、哺乳動物細胞は一般にリソソーム酵素の最適pHが低いので、中性pHでは低い活性を示します。このことと、大腸菌由来β-D-ガラクトシダーゼが高い回転置換率を有するという事実とを組み合わせることで、この酵素を非常に低い濃度で検出でき、感度の高い遺伝子発現レポーターとすることができます。

β-ガラクトシダーゼアッセイキット

蛍光発生基質CUGは実質的に水溶性であり、広範囲にわたる濃度範囲にわたってβ-D-ガラクトシダーゼ活性の高感度検出に用いられます。この基質は、一般的に用いられる発色性基質よりも桁違いに高い感度を有します。

β-ガラクトシダーゼ基質

これらの代替蛍光発生基質は、励起と発光波長を選ぶことで、β-D-ガラクトシダーゼ活性の高感度検出を可能にします。

フルオレセインジ-β-D-グルコピラノシド

フルオレセインジ-β-D-グルコピラノシド は、グルコシダーゼに対して最も感度の高い基質の1つです。非蛍光基質は、β-グルコシダーゼによって最初にフルオレセインモノグルコシドに対して、次に高蛍光フルオレセインに対して、経時的に加水分解されます。

fluoreporter-beta-galactosidase-s000575
選択ガイド
 FluoReporter® lacZ/Galactosidase Quantitation Kit
ターゲットβ-ガラクトシダーゼ
レポーターCUG
励起/蛍光 (nm)386/448
生細胞不可
ライセート
酵素調製
使用方法検出限界:0.5 pgのβ-gal
構成品基質とスタンダードをインキュベート。
フォーマット96ウェルフォーマットで1,000アッセイ
プロトコルの概要
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. CUGワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
カタログ 番号F2905
 4-Methylumbelliferyl β-D-Galactopyranoside (MUG)Fluorescein Di-β-D-Galactopyranoside (FDG)Resorufin β-D-Galactopyranoside 9H-(1,3-Dichloro-9,9-Dimethylacridin-2-One-7-yl) β-D-Galactopyranoside (DDAO galactoside)
ターゲットβ-ガラクトシダーゼβ-ガラクトシダーゼβ-ガラクトシダーゼβ-ガラクトシダーゼ
レポーターMUGFDGResorufin β-D-GalactopyranosideDDAO galactoside
励起/蛍光 (nm)360/449490/514571/585645/660
生細胞不可不可不可
ライセート
酵素調製
使用方法細胞抽出物のβ-ガラクトシド活性の検出β-ガラクトシド検出用の高感度な緑色蛍光発生基質β-ガラクトシド検出用の赤色蛍光発生基質β-ガラクトシド検出用の遠赤色蛍光発生基質
構成品酵素基質酵素基質酵素基質酵素基質
フォーマット1 g5 mg25 mg5 mg
プロトコルの概要
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 酵素ワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 基質のワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 基質のワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 基質のワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
カタログ 番号M1489MPF1179R1159D6488
 Fluorescein Di-β-D-Glucopyranoside (FDGlu)
ターゲットグルコシダーゼ
レポーターFDGlu
励起/蛍光 (nm)490/514
生細胞
ライセート
酵素調製
使用方法グルコシダーゼ検出用の高感度緑色蛍光発生基質
構成品酵素基質
フォーマット5 mg
プロトコルの概要
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 基質のワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
カタログ 番号F2881
 FluoReporter® lacZ/Galactosidase Quantitation Kit
ターゲットβ-ガラクトシダーゼ
レポーターCUG
励起/蛍光 (nm)386/448
生細胞不可
ライセート
酵素調製
使用方法検出限界:0.5 pgのβ-gal
構成品基質とスタンダードをインキュベート。
フォーマット96ウェルフォーマットで1,000アッセイ
プロトコルの概要
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. CUGワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
カタログ 番号F2905
 4-Methylumbelliferyl β-D-Galactopyranoside (MUG)Fluorescein Di-β-D-Galactopyranoside (FDG)Resorufin β-D-Galactopyranoside 9H-(1,3-Dichloro-9,9-Dimethylacridin-2-One-7-yl) β-D-Galactopyranoside (DDAO galactoside)
ターゲットβ-ガラクトシダーゼβ-ガラクトシダーゼβ-ガラクトシダーゼβ-ガラクトシダーゼ
レポーターMUGFDGResorufin β-D-GalactopyranosideDDAO galactoside
励起/蛍光 (nm)360/449490/514571/585645/660
生細胞不可不可不可
ライセート
酵素調製
使用方法細胞抽出物のβ-ガラクトシド活性の検出β-ガラクトシド検出用の高感度な緑色蛍光発生基質β-ガラクトシド検出用の赤色蛍光発生基質β-ガラクトシド検出用の遠赤色蛍光発生基質
構成品酵素基質酵素基質酵素基質酵素基質
フォーマット1 g5 mg25 mg5 mg
プロトコルの概要
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 酵素ワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 基質のワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 基質のワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 基質のワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
カタログ 番号M1489MPF1179R1159D6488
 Fluorescein Di-β-D-Glucopyranoside (FDGlu)
ターゲットグルコシダーゼ
レポーターFDGlu
励起/蛍光 (nm)490/514
生細胞
ライセート
酵素調製
使用方法グルコシダーゼ検出用の高感度緑色蛍光発生基質
構成品酵素基質
フォーマット5 mg
プロトコルの概要
  1. 細胞抽出物をウェルに添加。
  2. 基質のワーキング溶液を添加。
  3. インキュベート。
  4. 反応停止バッファの添加。
  5. 蛍光測定。
カタログ 番号F2881

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.