細胞シグナル伝達および脂質用のマイクロプレートアッセイ

リパーゼおよび無機リン酸は、循環器から炎症および癌に渡る範囲の疾患進行過程に関連している mTOR から GPCR への多くのシグナル伝達経路内で重要です。

溶液中でのリン酸塩およびホスファターゼ活性の測定は、複数のモデルで細胞の挙動を理解する上で基本なことです。Molecular Probes®は、多種多様な検体に対処する蛍光の読み取りで一連の高感度アッセイを可能にします。 

コレステロール

Amplex® Redコレステロールアッセイキットは、蛍光マイクロプレートリーダーまたはフローサイトメトリーを用いて、かなり低濃度のコレステロールを検出する高感度で迅速かつ簡単な方法を提供します。このアッセイは、遊離コレステロールとコレステリルエステルの両方を測定するとともに複数の時点での測定を可能にします。

リン酸およびピロリン酸用のアッセイ

PiPer™キットは、溶液中にリン酸またはピロリン酸が含まれていないことを検出する超感度の一段法です。このキットは、広範囲の種類のサンプルとともに使用可能であり、ATPアーゼ、GTPアーゼ、プロテインホスファターゼ、およびキナーゼなどの酵素で、リン酸またはピロリン酸放出の動態を測定することができます。シグナルは、Amplex® Redとの酵素結合反応を用いて検出されます。

ホスファターゼアッセイ

EnzCheck®アッセイキットは、精製されたまたはコンプレックス系での低レベルのホスファターゼ活性を検出するように設計されています。アッセイキットは、バッファーおよび対照群とともに試薬として、または96ウェルもしくは384ウェルマイクロプレートに前もって分注された形で、提供されます。キットに含まれるインヒビターによって酵素選択性が得られます。

ホスホリパーゼアッセイ

Amplex® Redホスホリパーゼキットは、蛍光マイクロプレートリーダーを用いて、ホスホリパーゼ活性をin vitroで連続的にモニターする感度の高い方法です。Amplex® Red試薬は、高感度の酵素結合反応を用いて、高蛍光シグナルを生じます。

Amplex® Red Cholesterol Assay Kit
Amplex® Redコレステロールアッセイキットを用いるコレステロールの検出 各反応では、1×反応バッファーに150 µM Amplex® Red試薬、1 U/mL HRP、1 U/mL コレステロール酸化酵素、1 U/mL コレステロールエステラーゼ、および指定量のコレステロールが含まれます。 反応を37℃で30分間、インキュベート。 蛍光の測定は、蛍光マイクロプレートリーダーを用いて560 ± 10 nm 励起および590 ± 10 nm蛍光検出で行った。 挿入図は、低コレステロール濃度（0～0.015 µg/mL）におけるアッセイの高い感度と優れた直線性を示しています。

選択ガイド
 Amplex® Red Cholesterol Assay Kit
ターゲットコレステロール
レポーターAmplex® Red試薬
励起/蛍光 (nm)571/585
生細胞不可
ライセート可
精製酵素可
使用方法検出下限200 nM
構成品アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。
フォーマット100 µL反応系で500アッセイ
プロトコルの概要
  1. スタンダードカーブ作成用サンプルを調製してウェルに添加。
  2. 反応バッファーで実験用サンプルを希釈し、ウェルに添加。
  3. Amplex® Redワーキング溶液を調製。
  4. Amplex® Red溶液をウェルに添加。
  5. インキュベート。
  6. 蛍光測定。
カタログ 番号A12216
 PiPer™ Phosphate Assay KitPiPer™ Pyrophosphate Assay Kit
ターゲットリン酸ピロリン酸
レポーターAmplex® Red 試薬Amplex® Red 試薬
励起/蛍光 (nm)571/585571/585
生細胞不可不可
ライセート可可
精製酵素可可
使用方法検出下限0.2 µMリン酸検出下限0.4 µMピロリン酸
構成品アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。
フォーマット100 µL反応系で1,000アッセイ100 µL反応系で1,000アッセイ
プロトコルの概要
  1. スタンダードカーブ作成用サンプルを調製してウェルに添加。
  2. 反応バッファーで実験用サンプルを希釈し、ウェルに添加。
  3. Amplex® Redワーキング溶液を調製。
  4. Amplex® Red溶液をアッセイウェルに添加。
  5. インキュベート。
  6. 蛍光測定。
カタログ 番号P22061P22062
 EnzChek® Phosphatase Assay KitRediPlate™ 96 EnzChek® Serine/Threonine Phosphatase Assay KitRediPlate™ 96 EnzChek® Tyrosine Phosphatase Assay Kit
ターゲット酸性ホスファターゼセリン/スレオニンホスファターゼチロシンホスファターゼ
レポーターDiFMUPDiFMUPDiFMUP
励起/蛍光 (nm)358/455358/455358/455
生細胞不可不可不可
ライセート可可可
精製酵素可可可
使用方法~2 µM Pi (~0.2µg/mL)~2 µM Pi (~0.2µg/mL)~2 µM Pi (~0.2µg/mL)
構成品アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。アッセイバッファー、スタンダード、およびインヒビターを含み、インヒビターはSer/Thr ホスファターゼのみの活性がモニターされるようにします。アッセイバッファー、スタンダード、およびインヒビターを含み、インヒビターはチロシンホスファターゼのみの活性がモニターされるようにします。
フォーマット100 µL反応系で1,000アッセイ96-マイクロプレートウェルに予め分注
プロトコルの概要
  1. DiFMUP基質を調製してウェルに添加。
  2. サンプルおよびコントロールをウェルに添加。
  3. サンプルをインキュベート。
  4. 蛍光測定。
  5. スタンダードカーブを用いてホスファターゼ活性を決定。
  1. 適当な添加物を加えることによって、反応バッファーを最適化。
  2. 基質とスタンダードを再水和。
  3. サンプルをアッセイウェルに添加。
  4. インキュベート。
  5. 蛍光測定。
  6. スタンダードカーブを用いて、セリン/スレオニン活性を決定。
カタログ 番号E12020R33700R22067
 Amplex® Red Phosphatidylcholine-Specific Phospholipase C Assay KitAmplex® Red Phospholipase D Assay Kit
ターゲットホスホリパーゼ Cホスホリパーゼ D
レポーターAmplex® RedAmplex® Red
励起/蛍光 (nm)571/585571/585
生細胞不可不可
ライセート可可
精製酵素可可
使用方法検出下限2x10–4 U/mL検出下限1x10-2 U/mL
構成品アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。
フォーマット200 µL反応系で500アッセイ200 µL反応系で500アッセイ
プロトコルの概要
  1. スタンダードカーブ作成用サンプルを調製してウェルに添加。
  2. 実験用サンプルを反応バッファーで希釈し、ウェルに添加。
  3. Amplex® Redワーキング溶液を調製。
  4. Amplex® Red溶液をウェルに添加。
  5. インキュベート。
  6. 蛍光測定。
  1. スタンダードカーブ作成用サンプルを調製してウェルに添加。
  2. 実験用サンプルを反応バッファーで希釈し、ウェルに添加。
  3. Amplex® Redワーキング溶液を調製。
  4. Amplex® Red溶液をウェルに添加。
  5. インキュベート。
  6. 蛍光測定。
カタログ 番号A12218A12219
コレステロール
 Amplex® Red Cholesterol Assay Kit
ターゲットコレステロール
レポーターAmplex® Red試薬
励起/蛍光 (nm)571/585
生細胞不可
ライセート可
精製酵素可
使用方法検出下限200 nM
構成品アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。
フォーマット100 µL反応系で500アッセイ
プロトコルの概要
  1. スタンダードカーブ作成用サンプルを調製してウェルに添加。
  2. 反応バッファーで実験用サンプルを希釈し、ウェルに添加。
  3. Amplex® Redワーキング溶液を調製。
  4. Amplex® Red溶液をウェルに添加。
  5. インキュベート。
  6. 蛍光測定。
カタログ 番号A12216
ホスファターゼ/ピロリン酸
 PiPer™ Phosphate Assay KitPiPer™ Pyrophosphate Assay Kit
ターゲットリン酸ピロリン酸
レポーターAmplex® Red 試薬Amplex® Red 試薬
励起/蛍光 (nm)571/585571/585
生細胞不可不可
ライセート可可
精製酵素可可
使用方法検出下限0.2 µMリン酸検出下限0.4 µMピロリン酸
構成品アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。
フォーマット100 µL反応系で1,000アッセイ100 µL反応系で1,000アッセイ
プロトコルの概要
  1. スタンダードカーブ作成用サンプルを調製してウェルに添加。
  2. 反応バッファーで実験用サンプルを希釈し、ウェルに添加。
  3. Amplex® Redワーキング溶液を調製。
  4. Amplex® Red溶液をアッセイウェルに添加。
  5. インキュベート。
  6. 蛍光測定。
カタログ 番号P22061P22062
ホスファターゼ
 EnzChek® Phosphatase Assay KitRediPlate™ 96 EnzChek® Serine/Threonine Phosphatase Assay KitRediPlate™ 96 EnzChek® Tyrosine Phosphatase Assay Kit
ターゲット酸性ホスファターゼセリン/スレオニンホスファターゼチロシンホスファターゼ
レポーターDiFMUPDiFMUPDiFMUP
励起/蛍光 (nm)358/455358/455358/455
生細胞不可不可不可
ライセート可可可
精製酵素可可可
使用方法~2 µM Pi (~0.2µg/mL)~2 µM Pi (~0.2µg/mL)~2 µM Pi (~0.2µg/mL)
構成品アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。アッセイバッファー、スタンダード、およびインヒビターを含み、インヒビターはSer/Thr ホスファターゼのみの活性がモニターされるようにします。アッセイバッファー、スタンダード、およびインヒビターを含み、インヒビターはチロシンホスファターゼのみの活性がモニターされるようにします。
フォーマット100 µL反応系で1,000アッセイ96-マイクロプレートウェルに予め分注
プロトコルの概要
  1. DiFMUP基質を調製してウェルに添加。
  2. サンプルおよびコントロールをウェルに添加。
  3. サンプルをインキュベート。
  4. 蛍光測定。
  5. スタンダードカーブを用いてホスファターゼ活性を決定。
  1. 適当な添加物を加えることによって、反応バッファーを最適化。
  2. 基質とスタンダードを再水和。
  3. サンプルをアッセイウェルに添加。
  4. インキュベート。
  5. 蛍光測定。
  6. スタンダードカーブを用いて、セリン/スレオニン活性を決定。
カタログ 番号E12020R33700R22067
ホスホリパーゼ
 Amplex® Red Phosphatidylcholine-Specific Phospholipase C Assay KitAmplex® Red Phospholipase D Assay Kit
ターゲットホスホリパーゼ Cホスホリパーゼ D
レポーターAmplex® RedAmplex® Red
励起/蛍光 (nm)571/585571/585
生細胞不可不可
ライセート可可
精製酵素可可
使用方法検出下限2x10–4 U/mL検出下限1x10-2 U/mL
構成品アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。アッセイバッファーおよびコントロールが含まれます。
フォーマット200 µL反応系で500アッセイ200 µL反応系で500アッセイ
プロトコルの概要
  1. スタンダードカーブ作成用サンプルを調製してウェルに添加。
  2. 実験用サンプルを反応バッファーで希釈し、ウェルに添加。
  3. Amplex® Redワーキング溶液を調製。
  4. Amplex® Red溶液をウェルに添加。
  5. インキュベート。
  6. 蛍光測定。
  1. スタンダードカーブ作成用サンプルを調製してウェルに添加。
  2. 実験用サンプルを反応バッファーで希釈し、ウェルに添加。
  3. Amplex® Redワーキング溶液を調製。
  4. Amplex® Red溶液をウェルに添加。
  5. インキュベート。
  6. 蛍光測定。
カタログ 番号A12218A12219

リソース

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.