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PCR産物をサンガーシーケンシングの準備をする前に、PCRクリーンアップステップを行う必要があります。サンガーシーケンシングは、塩基ごとにDNA配列を読み取るための非常に正確な手法であるため、反応混合物をクリーンアップして、それらの未結合プライマーおよびdNTPが結果に干渉しないようにすることが非常に重要です。
ExoSAP-IT PCRクリーンアップ試薬により わずかな時間でどのように高品質なシーケンシング結果を出せるのか、詳細をご覧ください。
ExoSAP-IT PCR試薬は、シンプルなプロトコルと短いアンプリコンと長いアンプリコンの両方を100%回収することで、限られたサンプルを節約し、ワークフローの効率を向上させることができます。
サンガーシーケンシングベースのメソッドは、検証や長い連続したDNA配列の読み取り(>500ヌクレオチド)で広く使用されていますが、多くのゲノム解析アプリケーションは、多数のターゲットをシーケンシングするための拡張性と手頃な価格のために次世代シーケンシング(NGS)テクノロジーに移行しつつあります。
ExoSAP-IT Express試薬で確かな結果が得られます。より高い収量と完全なPCR産物の回収により、精度が向上します。
Applied Biosystems ExoSAP-IT Express 試薬は、特別に調製されたバッファーに、エキソヌクレアーゼ I とエビアルカリホスファターゼ(SAP)を組み合わせた独自の混合物で、PCR後に過剰なプライマーや dNTP を除去します。エキソヌクレアーゼIは、残存する一本鎖プライマーと、PCR中に生成される余分な一本鎖 DNA を除去します。その後の反応を妨げる可能性のあるPCR混合物から、残りのdNTPを除去します。
図1.ExoSAP-IT Express 試薬によるPCR反応の酵素クリーンアップ。2 μLのExoSAP-IT Express試薬で5 μLのPCR産物を処理できます。処理は37℃で4分間行い、インキュベーション時間は80℃で1分間行い、両方の酵素を不可逆的に不活化させます。酵素不活性化が完了すると、PCR産物はシーケンシング(サンガー/NGS)、フラグメント解析、SNP解析、in vitro転写、または単一塩基伸長などの下流アプリケーションに使用できます。
ExoSAP-IT Expess 試薬をPCR産物に直接追加することで、チューブ、ウェル、カラムへの移送ステップが不要になり、アンプリコンを節約できるため、クロスコンタミネーションの可能性を減らすことができます。。作業は簡単で、これで終わりです。ExoSAP-IT Expess 試薬を用いた酵素クリーンアップの後、プライマーおよびdNTPは、DNAシーケンシングやその他のダウンストリームアプリケーションと干渉しなくなります。
ExoSAP-IT Express PCRクリーンアップエージェントは、PCR反応から過剰なプライマーと未結合ヌクレオチドをわずか5分で除去します。この酵素クリーンアップ法は、スピンカラムやビーズなどの他の精製法に比べて、正確性、収量の向上、および所要時間の短縮を実現します。
ExoSAP-IT Express試薬は、従来のExoSAP-ITと同じ優れたクリーンアップを提供しながら、迅速な処理時間とリソース使用効率の向上をもたらします。スピンカラム、磁気ビーズ、沈降、ろ過、ゲル精製を排除—新しいExoSAP-IT技術により、最小限のステップでサンプルクリーンアップ時間を大幅に短縮し、最もシンプルなワークフローを実現します(図を参照)。
図2.ExoSAP-IT Expess 試薬と他の一般的な方法との比較。
ExoSAP-IT試薬は、PCR産物をクリーンアップするための独自の1チューブ、1ステップの酵素法を提供します。ExoSAP-IT試薬はすべて、フラグメントサイズにかかわらず、PCR産物の100%回収します。このPCRクリーンアップ法は、過剰なプライマーおよびdNTPを除去し、ダウンストリームアプリケーションに干渉しません。。
迅速な所要時間やハイスループットソリューションをお探しのお客様には、当社のPCRクリーンアップ試薬をお勧めいたします。当社のセレクションガイドを使用して、お客様の次の実験に最適な組成をお選びいただけます。
ExoSAP-IT Express試薬 | ExoSAP-IT試薬 | HT ExoSAP-IT Fastハイスループット試薬 | |
プロトコル時間 | 5分 | 30分 | 14分 |
フォーマット |
| シングルチューブ |
|
スループットレベル | 低~高;あらゆるサンプルサイズの処理に推奨 | 低~中;1度に1~96サンプルを処理する場合に推奨 | 高;1度に96以上のサンプルを処理する場合に推奨 |
プラットフォーム | シングルまたはマルチチャンネルピペット、自動リキッドハンドリングプラットフォーム(粘度が低いため取り扱いが容易) | シングルチャンネルピペット | 自動リキッドハンドリングプラットフォーム(粘度が低いため取り扱いが容易) |
–20℃での 凍結 | なし | なし | あり |
安定性 | –20℃で最大2年間 | –20℃で最大2年間 | –20℃で最大2年間、解凍後、4℃で1か月安定、室温で2日間安定 |
購入 | 購入 | 購入 |
酵素精製技術の優れたワークフローの利点の詳細をご覧ください。
ExoSAP-ITおよび ExoSAP-IT Express PCRクリーンアップ試薬は、磁気ビーズやスピンカラムと比較してワークフローの利点が大きく、同様の結果が得られます。
CleanSweep試薬とExoSAP-IT試薬を並べて比較し、ExoSAP-ITの有効性と機能的同等性を示します。
Seq It Outでは、皆様の日常的なサンガーシーケンシングおよびフラグメント解析の疑問にお答えします。
シーケンシングの歴史と研究ニーズに合ったプラットフォームの選び方について学べます。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.