キット、試薬、およびプロトコル

MagMAXウイルス／病原体キットは高い核酸回収率を実現するように設計されており、低力価サンプルに適合します。低～高容量のインプット範囲に対して、わずか2つのプロトコルで対応します。キャリアは不要であるため、ダウンストリームのNGSへの干渉が少なく、必要なステップも少なくて済みます。

MagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kit IおよびII（MVP IおよびII）は研究ラボでの使用が推奨されます。両キットは新しく開発され合理化されたプロトコルで検証済みで、半量の抽出試薬でサンプルインプット量200 µL（標準は400 µL）を処理できます。

この2つのMagMAXキットは機能的に同一で、RNAをビーズに移動させる化学的性質や全体的なワークフローも同じです。キットには次の2つの違いがあります：（a）SARS-CoV-2検査の異例な需要によるビーズコンポーネントの原材料の変更、および（b）MVP IIキットはバルク調製フォーマットでのみ提供。

SARS-CoV-2検査および単離へのKingFisherシステムおよびMagMAXまたはDynabeadsキットの使用に関するアプリケーションノートおよびサポート資料は、リソースタブをご参照ください。

これらのキットの性能データ、アプリケーションノート、および詳細なプロトコル情報は、上記の「詳細を見る」またはカタログ番号リンクをご参照ください。

KingFisher機器を使用したMagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kitのワークフロービデオは、上記のカタログ番号のいずれかでご覧になれます。

KingFisher機器で使用するプラスチック製品およびプレートセットアップ製品の詳細は、アクセサリタブをご参照ください。

低および高容量のインプットから高純度のgDNAを回収には、MagMAX DNA Multi-Sample Ultra 2.0 Kitをご使用ください。このキットは、プロテイナーゼK（PK）およびP-エンハンサーでサンプルを処理した後、革新的な溶解／結合溶液で細胞の溶解、タンパク質の変性、および高結合能磁気ビーズへのgDNAの捕捉を同時に行うことにより、最大限の収量を実現します。このキットは柔軟性を考慮して設計されているため、サンプルやバッファーの容量標準化ステップをスキップして、トラブルのない処理を実現します。たとえば、50 µLと400 µLのサンプルを同じプレートで同時に処理できます。

MagMAX DNA Multi-Sample Ultra 2.0 Kitの試薬はバルクでも提供されており、50～200 µLサンプルを2,000個、または200～400 µLのサンプルを1,000個処理できます。

KingFisher Ready DNA Ultra 2.0 Prefilled PlatesはMagMAX DNA Multi-Sample Ultra 2.0 Kitと同じ試薬を含み、同じ高品質の結果を提供しますが、プレートにはすでに試薬が充填されているため便利です。そのため、溶解液、洗浄溶液、および磁気ビーズを分注する必要がありません。プロトコルはシンプルです：フォイルを剥がし、サンプルとエンハンサー／プロテアーゼK溶液を加えて機器に挿入するだけです。

唾液サンプルから高純度のgDNAを回収するには、MagMAX gDNA Saliva KitをKingFisher機器とともにご使用ください。このキットは革新的な溶解／結合溶液でサンプルを処理し、細胞の溶解、タンパク質の変性、および高結合能磁気ビーズへのgDNAの捕捉を同時に行います。このキットは柔軟性を考慮して設計されているため、サンプルやバッファーの容量標準化ステップをスキップして、トラブルのない処理を実現します。たとえば、50 µLと400 µLのサンプルを同じプレートで同時に処理できます。このワークフローは、Genotek社のOragene™、IsoHelix社のGeneFiX™、 Biomatrica社のSalivaGard™などの唾液採取デバイスに適合します。

これらのMagMAXキットの性能データとプロトコルに関する情報は、上記の「詳細を見る」リンクをご参照ください。

KingFisher機器で使用するプラスチック製品およびプレートセットアップ製品の詳細は、アクセサリタブをご参照ください。

リキッドバイオプシーではほとんどの場合、正常細胞とがん細胞に由来するセルフリーDNA（cfDNA）が使用されます。腫瘍のみを提供する血流中のDNAは、一般的に循環腫瘍DNA （circulating tumor DNA；ctDNA）として参照され、これには他の方法では取得が困難な腫瘍に関する情報が詰まっています。これらのキットでは、磁気ビーズと最適化された化学的性質が組み合わされており、より効率的な核酸分離を実現します。これにより、断片化cfDNAが特異的に回収され、より大きなDNA分子は後に残ります。全核酸のcfDNA分画濃縮におけるこのような側面により、短いctDNAが濃縮され、qPCR、デジタルPCR（dPCR）、または次世代シーケンシング（NGS）を使用したダウンストリーム分析にすぐに使用できます。

cfDNAの重要性は確立されつつありますが、すべてが語られているわけではありません。cfRNAシーケンスは、microRNAおよび遺伝子融合の形で重要なバイオマーカーとして機能します。Total Nucleic Acid KitにはcfDNAと合わせてcfRNAが含まれているため、研究者は研究を拡大させ、人の健康を増進させることができます。

抽出および精製から分析までのリキッドバイオプシーワークフローを最適化するには、MagMAX Cell-Free DNA Isolation KitをKingFisher機器、Oncomineアッセイ、およびその他のダウンストリームアプリケーションとともにご使用ください。

リキッドバイオプシーのワークフローを拡張して、同一サンプルからセルフリーDNAとRNA（cfRNA）の両方を含めるには、MagMAX Cell-Free Total Nucleic Acid Isolation Kitをご使用ください。

これらのMagMAXキットの性能データ、アプリケーションノート、および詳細なプロトコルに関する情報は、上記の「詳細はこちら」リンクをご参照ください。

KingFisher機器を使用したMagMAX Cell-Free DNA Isolation Kitのワークフロービデオを見るには、上記のカタログ番号リンクをご参照ください。

KingFisher機器で使用するプラスチック製品およびプレートセットアップ製品の詳細は、アクセサリタブをご参照ください。

MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra Kitを使用すると、FFPEサンプルから迅速かつ確実に核酸を分離できます。同じサンプルからDNAとRNAを1つのワークフローで連続的に抽出でき、貴重なサンプルからより豊富なデータを引き出せます。たとえば、ホットスポット変異、CNV、遺伝子融合、挿入欠失などの重要なバイオマーカーを調査できます。

このキットは、固形がん生検、針生検、および穿刺吸引など、複数の研究サンプルタイプに対して検証されています。また、キシレンに代わる脱パラフィン処理剤であるCitriSolv™洗浄剤にも適合しており、毒性が低く、化学的ドラフトなしで使用できます。

脱パラフィン処理を高速化するには、FFPE DNA/RNA Ultra KitをApplied Biosystems™ AutoLys™システムと組み合わせてご使用ください。AutoLysチューブおよびアクセサリは、ピペット操作スッテプを減らすよう、事前処理済みチューブとラックシステムで構成されており、有害な化学物質の使用を排除し、組織サンプルの損失を最小限に抑えます。

このMagMAXキットの性能データ、アプリケーションノート、および詳細なプロトコルに関する情報は、上記の詳細はこちらリンクをご参照ください。

KingFisher機器で使用するプラスチック製品およびプレートセットアップ製品の詳細は、アクセサリタブをご参照ください。

MagMAX mirVana Total RNA Isolation Kitを使用して、microRNA（miRNA）などの低分子RNAからノンコーディングRNA、メッセンジャーRNA、リボソームRNAまで、細胞内に存在する全範囲のRNAタイプを含む真のトータルRNAを低または高スループットで分離できます。このキットは、わずか20 µLのヌクレアーゼフリー水中の高濃度RNAを溶出し、その化学的性質は長期にわたりRNAを安定させ、維持します。

抽出されたRNAは、miRNAシーケンシングやqRT-PCRなどのさまざまなダウンストリーム遺伝子発現アプリケーションに適しています。ワークフローは、TaqMan™ Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit、およびその他のTaqMan Advanced miRNA Assaysで機能することが検証されています。

このMagMAXキットの性能データについては、上記の詳細を見るリンクをご参照ください。

このMagMAXキットのプロトコル情報とアプリケーションノート、またはこのキットのワークフロービデオ（手動分離のみ）を見るには、上記のカタログ番号リンクをご参照ください。

KingFisher機器で使用するプラスチック製品およびプレートセットアップ製品の詳細は、アクセサリタブをご参照ください。

これらのDynabeadsキットのプロトコルは、上記のカタログ番号リンクをご参照ください。

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MagMAXウイルス／病原体キットは高い核酸回収率を実現するように設計されており、低力価サンプルに適合します。低～高容量のインプット範囲に対して、わずか2つのプロトコルで対応します。キャリアは不要であるため、ダウンストリームのNGSへの干渉が少なく、必要なステップも少なくて済みます。

MagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kitは、ウイルスやグラム陰性細菌を含有するサンプルからRNAおよびDNA を抽出するための高感度でシンプルな方法を提供します。これは、複数のサンプルタイプに添加したわずか50コピーのインプット量を検出できたことにより実証されています。

MagMAX Viral/Pathogen Ultra Nucleic Acid Isolation Kit（A42356）には、標準的なViral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kitsと同じ試薬の他、グラム陽性細菌、酵母、および真菌などの困難な病原体を溶解して核酸を回収するのに必要な酵素ミックスも追加で含まれています。検出が困難な気道微生物を含む未知の病原体を、広範囲に検出および同定するのに使用できます。ウイルスRNAの分離にはこの追加の酵素は必要ないため、このキットはSARS-CoV-2検査には推奨されません。

注記：SARS-CoV-2 RNAを分離する必要がある場合は、MagMAX Viral/Pathogen II (MVPII) Nucleic Acid Isolation Kit（カタログ番号A48383R）をご注文になり、MagMAX Viral/Pathogen Ultra Nucleic Acid Isolation Kit（カタログ番号A42356）ではないことをご確認ください。Ultraバージョンには、グラム陽性細菌および真菌の溶解に必要な追加の酵素ミックスが含まれており、これはSARS-CoV-2 RNAの分離には不要です。

これらのMagMAXキットの性能データ、アプリケーションノート、および詳細なプロトコルに関する情報は、上記の「詳細を見る」または カタログ番号リンクをご参照ください。

KingFisherシステムを使用したMagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kitのワークフロービデオは、上記のカタログ番号のいずれかでご覧になれます。

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ヒトマイクロバイオームは複雑かつ多面的で、それぞれの体内の生息環境は異なる優勢的な特徴的分類群を持ちます。腸には人体に関連する微生物が大量に含まれ、もっとも徹底的に研究された生態系の1つです。糞便サンプルは入手しやすく大量のバイオマスを含むため、これらの分析に一般的に使用されます。唾液や尿などの体液の研究は比較的少ないですが、それぞれは固有の細菌コミュニティを有しますす。

糞便、尿、唾液、およびその他のサンプルからの全核酸の分離には、MagMAX Microbiome Ultra Nucleic Acid Isolation Kitを使用できます。このキットは、メタゲノミクス研究やその他のダウンストリームアプリケーションに最適な、高収量、高純度、高品質、および阻害物質フリーのDNAおよびRNAを抽出できます。酵素ベースの消化では、他の処理ステップを行うことなく、幅広い微生物から核酸を回収できます。

このキットは、ウイルスおよび細菌の両方の核酸を分離でき、哺乳類、爬虫類、魚類、およ鳥類の糞便サンプル、ウイルス移送培地（VTM）、皮膚、ミルクサンプル、および酵母や細菌の培養で試験されています。独自のマイクロバイオーム検査を開発し、全核酸を分離するための低スループットおよび／または高スループットのソリューションを必要としている研究ラボに推奨されます。

このMagMAXキットの性能データおよびアプリケーションノートは、上記の詳細はこちらリンクをご参照ください。

このMagMAXキットのプロトコル情報は、上記のカタログ番号リンクのいずれかでご覧になれます。

KingFisherシステムで使用するプラスチック製品およびプレートセットアップ製品の詳細は、アクセサリタブをご参照ください

植物細胞壁の分解は非常に困難な場合があり、溶解物はタンニン、フェノール、および複合多糖などの化合物を大量にを含んでいます、これらの化合物は核酸の質に影響を及ぼし、ダウンストリームの反応を阻害する可能性があります。こうした課題にもかかわらず、これらのMagMAXキットは次のようなさまざまなな植物サンプル（シロイヌナズナ、ピーマンの葉、 キャノーラ／菜種の葉、トウモロコシの葉、ネギ、レモンの葉、オート麦の葉、オレンジ、松葉、ホウレンソウの葉、トマトの葉、および小麦草の葉など）からDNAまたはRNAを効果的に分離できます。

MagMAX Plant DNAおよびRNA KitsをKingFisher機器とともに使用すると、植物真菌を含むさまざまな植物種や組織タイプからDNAおよびRNAを自動精製できます。精製されたDNAまたはRNAには、タンパク質、ヌクレアーゼ、その他の汚染物質、阻害物質、および核酸が含まれていないため、PCR、qPCR、およびNGSなどの幅広いダウンストリームアプリケーションに使用できます。このキットは、10～100 mgの植物サンプルからDNAおよびRNAを分離できるように最適化されています。

これらのMagMAXキットの性能データおよびプロトコルは、上記のカタログ番号リンクをご参照ください。

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IPプロセスには2つの方法があります。ターゲットのタンパク質が豊富な場合は、直接法を使用できます。この方法では、まず一次抗体（Ab）をDynabeads磁気ビーズとインキュベーションし、その後洗浄して未結合の抗体を除去します。その後、Ab結合ビーズをサンプルとともにインキュベーションして捕捉し、続いて洗浄と溶出を行います。

ターゲットのタンパク質が豊富でない場合は、間接法を使用します。この方法では、まず一次抗体を細胞溶解物とインキュベーションして、Ab抗原複合体を形成します。その後、Dynabeadsビーズをサンプルに添加して複合体を捕捉し、続いて洗浄と溶出を行います。

IPは手動で実行できますが、洗浄ステップ数とハンズオン時間はサンプル数に比例して増加します。KingFisherシステムでプロセスを自動化することにより、ピペッティングやその他の手動操作により生じる一貫性の欠如を排除できます。自動化プロトコルは手動プロトコルを再現するため、同等に高い標的タンパク質収量と、同様に低い非特異的結合および高い再現性を得られます。サンプル数が10個でも、または96個でも、IPプロトコルは40分未満で完了します。試薬をプレートにロードし、Start（スタート）ボタンを押すだけで、ダウンストリーム分析の準備ができたころにはIPが完了しています。使用するAbや、標的タンパク質の存在量および／または特異性によっては、インキュベーション時間などの最適化が必要になる場合があります。

キットの選択は、分離が必要なターゲットのタンパク質によります。タンパク質に対する一次抗体をお持ちの場合は、Dynabeads Protein AまたはG、またはそれらに関連するキットの使用が推奨されます。二次抗体をお持ちの場合は、Dynabeads M-280 IgG製品のいずれかをご使用ください。ビオチン化抗体またはリガンドをお持ちの場合は、Dynabeads M-280 Streptavidinをご使用ください。

これらのDynabeads製品の性能データ、アプリケーションノート、およびプロトコルに関する情報は、上記のカタログ番号リンクをご参照ください。

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Thermo Scientific SMART Digest KitsとKingFisher機器の組み合わせは、ペプチドマッピングや定量アプリケーション用にタンパク質を自動消化することにおける最新の進歩です。このキットにより、タンパク質消化は迅速かつシンプルになり、再現性が確保され、自動化が容易になります。

タンパク質消化キットは、最適化された熱安定性酵素を磁気ビーズ上に使用しているため、翻訳後修飾の可能性を最小限に抑えます。プロセスの自動化は手動操作を最小限に抑え、反応の最適なタイミングを確保し、高温への暴露を低減するため、結果の再現性が向上します。^[1]

Immunoaffinity（IA）キットは、酵素消化とIA捕捉を1つのビーズ上に組み合わせており、高感度を実現します。この革新は、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）および液体クロマトグラフィー／質量分析（LC／MS）の結果に高い信頼性を提供します。SMART Digestキットは、バイオマーカーおよびバイオ医薬品の特性評価および定量アプリケーションに特に役立ちます。

ペプチドマッピングアプリケーションには、タンパク質の配列特異的な切断に合わせて、最適化済み熱安定性トリプシン、キモトリプシン、またはプロテイナーゼKの酵素消化からお選びください。磁気ビーズ上の酵素は高温で活性化され、タンパク質変性条件下での消化を加速します。

• トリプシンは、リジンおよびアルギニンアミノ酸残基のC末端側を切断します
• キモトリプシンは、チロシン、フェニルアラニン、およびトリプトファンなどの芳香族残基が形成したペプチド結合を切断します
• プロテイナーゼKは、αアミノ基がブロックされた脂肪族および芳香族アミノ酸のカルボキシル基に隣接するペプチド結合を切断します

ペプチド定量アプリケーションでは、SMART Digest IA Kitsは1つのウェルでトリプシン消化と免疫親和性捕捉を行います。免疫親和性部位（ストレプトアビジン、タンパク質A、またはタンパク質G）が、複雑な生物学的マトリックスから低レベルのタンパク質を精製することによって感度を向上させるために通常使用されます。

これらのSMART Digest製品の性能データおよびアプリケーションノートは、上記のカタログ番号リンクをご参照ください。

KingFisherシステムで使用するプラスチック製品およびプレートセットアップ製品の詳細は、アクセサリタブをご参照ください。

細胞分離プロセスには3つの方法があります。ポジティブ細胞分離では、Dynabeads試薬がターゲット細胞に結合し、ビーズ／細胞複合体がKingFisher磁気チップに引き寄せられます。上清を取り除いた後には、純粋なターゲット細胞のみが残ります。

ネガティブ細胞単離では、Dynabeads Untouched™キットを使用して不要な細胞を除去すると、ビーズフリーで未処理のターゲット細胞がサンプル中に残ります。たとえば、Dynabeads Untouched Human T Cells Kitには、B細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、単球、血小板、樹状細胞、顆粒球、および赤血球を除去する抗体混合物が含まれており、後に使用するすべてのT細胞（かつT細胞のみ）を残します。他のDynabeads Untouchedキットは、CD4またはCD8 T細胞サブセット以外のすべてを除去できます。

複数の細胞タイプを分離したい場合は、細胞特異的除去Dynabeads試薬を使用して、不均一なサンプルから不要な細胞タイプすべてを99%超の効率で除去できます。除去済みの上清には、目的の細胞のみが残ります。

これらのDynabeads製品の性能データ、アプリケーションノート、およびプロトコルに関する情報は、上記の詳細はこちらリンクをご参照ください。

KingFisher機器で使用するプラスチック製品およびプレートセットアップ製品の詳細は、アクセサリタブをご参照ください。