通过活力和神经突生长测量神经元细胞的健康状况

测量神经元细胞健康状况的工具对于监测多种因素（包括生物修饰剂、神经细胞培养条件、药物化合物和环境神经毒剂）的影响至关重要。特别是神经细胞活力和神经突生长测量，这是神经细胞元健康状况和功能的两项最常见的指标。例如，研究针对神经退行性疾病的新治疗策略的研究人员通常需要确定其研究方法是否能改善神经功能，同时尽量减少任何细胞毒性相关效应。理想情况下，可使用同一份样本进行神经细胞活力和神经突生长测量，以区分神经元细胞健康状况的一个还是两个方面受到影响。

Molecular Probes® 神经突生长染色试剂盒提供双色荧光染色剂，可对同一样本中的神经突生长和细胞活力进行简单、快速的可视化和定量测定。通过细胞膜外表面的亮橙色染色（激发/发射波长约 555 nm/约 565 nm）监测神经突生长。使用可渗透细胞且经活细胞转化可发出绿色荧光的活力指示剂染料（激发/发射波长约 495 nm/约 515 nm）可同时测定细胞活力。使用此试剂盒的典型工作流程需要 15-30 分钟，只需简单几步即可进行测量。

适用于成像/荧光显微镜检查或微孔板读数仪分析的活细胞和固定细胞方案见下文。

重要提示：不建议将神经突生长染色试剂盒用于：区分神经元与非神经元细胞类型（即，该试剂盒中使用的染料对神经元细胞不具有特异性，而是会对所有细胞类型进行染色）；与细胞透化方案配合使用；实时成像应用。

所需材料

细胞

• 神经细胞

注：为了比较相对神经突生长，建议在实验中包含适当的对照（例如几乎没有神经突生长的对照细胞）。对于微孔板读数仪定量测定，建议再包含一个无细胞对照，用于减去荧光背景。

培养基和试剂

专用工具

• 荧光显微镜
• 荧光微孔板读数仪（仅底读模式）

注：标准 FITC 或荧光素滤光片设置适用于绿色荧光细胞活力指示剂，而标准 TRITC 或 Cy3 滤光片设置则适用于橙色荧光细胞膜染色剂。

如需更多指南，请参阅随神经突生长染色试剂盒提供的方案。

活细胞染色方案

1. 从待染色培养物中去除培养基。可选：用 D-PBS 冲洗待染色培养物并吸出。
2. 在待测定的每个孔或培养皿中加入适当体积的 1X 工作染色溶液。
3. 在室温或 37°C 下孵育培养物 10-20 分钟。
4. 去除染色剂并丢弃。可选：用 D-PBS 冲洗培养物并吸出。
5. 在待测定的每个孔或培养皿中加入适当体积的 1X 工作背景抑制溶液。
6. 在荧光显微镜下或使用荧光微孔板读数仪分析样本。
7. 可选：分析后，用新的细胞培养基替换背景抑制溶液并继续维持培养。最早可在初始染色后 24 小时对已染色细胞进行重新染色。

固定和染色方案

如果需要固定细胞，1X 工作染色溶液应以含 4% 多聚甲醛的缓冲液制备。

1. 从待染色培养物中去除培养基。可选：用 D-PBS 冲洗待染色培养物并吸出。
2. 在待测定的每个孔或培养皿中加入适当体积的 1X 工作染色溶液（以含 4% 多聚甲醛的缓冲液制备）。
3. 在室温或 37°C 下孵育培养物 10-20 分钟。
4. 去除染色剂并丢弃。可选：用 D-PBS 冲洗培养物并吸出。
5. 在待测定的每个孔或培养皿中加入适当体积的 1X 工作背景抑制溶液。
6. 在荧光显微镜下或使用荧光微孔板读数仪分析样本。

图 1 - 使用双色神经突生长染色试剂盒对细胞活力和神经突起生长进行可视化和定量测定。(A) 在使用神经突生长染色试剂盒进行染色前，将冻存原代大鼠皮层神经元（货号 A1084002）解冻并铺到 96 孔板中，然后在添加 B-27 无血清补充剂（货号 17504044）或 B-27 Plus 补充剂（货号 A3582801）的 Neurobasal 培养基（货号 21103049）中生长 7 天。左侧为使用该试剂盒中的绿色荧光细胞活力指示剂（主要对活细胞的细胞体进行染色）所得的图像。右侧为同一视野中使用该试剂盒中的橙色荧光细胞膜染色剂（不仅对细胞体进行染色，还对神经突延伸膜进行染色）所得的图像。(B) 在使用微孔板读数仪（左图）测量相对细胞活力和神经突生长及拍摄代表孔的图像（右图）前，使用神经生长因子 (NGF) 连续稀释液处理 PC12 衍生的 Neuroscreen™-1 细胞 4 天。神经突生长染色试剂盒可同时测量细胞活力（绿色荧光；在本实验中未发生变化）和相对神经突生长（橙色荧光；以 NGF 剂量依赖性方式增加）。

 

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荧光成像滤光片设置

荧光板读数仪滤光片设置 - 基于单色器

重要提示！仅底读模式应与在底部透明的微孔板中染色的细胞配合使用。

荧光板读数仪滤光片设置 - 基于滤光片

重要提示！仅底读模式应与在底部透明的微孔板中染色的细胞配合使用。