在大鼠中进行帕金森病建模

单侧多巴胺能 (DA) 病变动物存在运动活动失衡。完整的 DA 病变可通过内侧前脑束 (MFB) 中 6-羟基多巴胺的单侧脑内立体定向注入来诱导。此模型在 DA 替代治疗研究中非常有用。本章介绍了利用完整单侧 DA 病变诱导大鼠帕金森病模型的方法。

所需材料

大鼠

• Sprague-Dawley 大鼠 (200-250 g)

培养基和试剂

• 无菌盐水
• 异氟烷
• Betadine
• 70% 乙醇
• 6-羟基多巴胺（Sigma-Aldrich，货号 H116）
• 阿扑吗啡（Sigma-Aldrich，货号 A4393）
• 安非他命（Sigma-Aldrich，货号 A1263）

专用工具

• 立体定向框架
• 动物平衡
• 异氟烷吸入室
• 电动剃刀
• 解剖刀
• 组织镊子
• 剪刀
• 10 μL Hamilton 注射器和针头
• 牙钻
• 缝线或吻合钉

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准备动物

1. 称量大鼠并将其置于异氟烷室中，并应用氧气和异氟烷直到动物被深度麻醉为止。
2. 将大鼠置于立体定位框架中，并使用手术胶带将连接到麻醉机的塑料管固定到大鼠的鼻部。将异氟烷维持在约 1.5%，氧气流量为 2-3 L/min。
3. 用电动剃刀剃除大鼠头的顶部毛发。用 Betadine 和 70% 乙醇清洁皮肤。
4. 使用解剖刀做一个中线切口，并在冠状与矢状缝线交叉点标识前囟。
5. 调整大鼠中的切牙条，直至 λ 和前囟颅骨点的高度相等。
6. 计算注射用立体定向坐标。对于 MFB 病变，坐标参照前囟：前后 (A/P) - 2.2 mm；中侧 (M/L) 1.5 mm。
7. 使用牙钻在目标部位钻一个钻孔。

给予 6-OHDA

1. 向 10 μL Hamilton 注射器填充 5 μL 6-OHDA 溶液。将注射器连接到立体定向框架上的支架上。
2. 降低 Hamilton 注射器的针头，使其距硬脑膜 8 mm。
3. 按 1 μL/min 的速度注入 6 OHDA 溶液。
4. 将针头留在适当位置 5 分钟，然后缓慢地撤回吸头。
5. 用缝线或吻合钉闭合头皮边缘。从立体定位框架中取出大鼠，并将其放入其笼舍中。将食物放在笼的地板上，术后监测动物体重 3 天。

在注射 6-OHDA 后 10-14 天内评估行为，使用多巴胺受体激动剂阿扑吗啡 (0.2 mg/kg, i.p.) 挑战时 30 分钟内出现至少 210 次对侧旋转的大鼠或使用 DA 释放物质安非他命 (5 mg/kg, i.p.) 挑战时 90 分钟内出现 630 次同侧旋转的大鼠适合进行进一步研究。

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