- 快速 - 在细胞铺板时转染细胞,可节省一天时间
- 高效 - 递送效率较高,因此可使用较低 siRNA 浓度
- 可重现 - 一致的批间、板间和孔间结果
- 通用 - 适用于多种细胞系
- 强效 - 在存在或不存在血清的情况下均具有低细胞毒性
进行和优化基因沉默实验可能非常耗时,部分原因是需要在转染前一天对细胞进行预铺板。然而,siPORT™ NeoFX™ 转染试剂为简化 siRNA 转染实验流程而开发。在传代培养贴壁细胞时,脂质体制剂可高效转染贴壁细胞,而不增加细胞毒性。使用 siPORT NeoFX 转染试剂可在不到 24 小时内成功完成基因沉默实验。该方案可适应多种细胞系(图 1)和实验设计,包括高通量应用。
在铺板过程中转染细胞,可节省一天时间
尽管
siPORT NeoFX 转染试剂与标准转染方法兼容,但也可用于在传代培养期间转染细胞。只需将这种转染试剂与 siRNA 混合,孵育以形成转染复合物,添加到培养物孔中,并覆盖细胞。相较于传统的铺板转染程序,该方案可节省一天时间。此外,在转染后无需去除或更换培养基,因为即使在存在血清的情况下,转染复合物仍具有活性和稳定性。
递送效率较高,因此可使用较低 siRNA 浓度
siRNA 浓度 ≥ 100 nM 可导致培养的哺乳动物细胞中基因表达的非特异性变化(脱靶效应)。将用于转染的 siRNA 的量减少至 1-20 nM 可尽可能减少此类非特异性效应,同时仍可实现高效的靶基因沉默。已对 siPORT NeoFX 转染试剂进行优化,甚至可递送皮摩尔量的 siRNA(图 2)。
获得一致的结果
siPORT NeoFX 转染试剂在多种温度下都非常稳定,因此在不同日期和不同实验之间都能够实现可重现的 siRNA 递送。所有这些有利的特性使该转染试剂成为用于 RNAi 筛选实验的高效试剂。
图 1. siPORT™ NeoFX™ 转染试剂将 siRNA 高效递送至多种细胞类型中。使用 siPORT NeoFX 转染试剂将 Silencer GAPDH siRNA 或阴性对照 #1 siRNA (10 nM) 转染至指定细胞类型中。所示数据为相对于阴性对照 siRNA 转染细胞的剩余 mRNA 水平(转染后 48 小时通过实时荧光定量 PCR 测定)。
图 2.使用低浓度 siRNA 实现高效转染。对 HeLa 细胞进行胰蛋白酶化处理并以 4 x 10
4 个细胞/mL 的浓度将其重悬于生长培养基中。使用化学合成的 GAPDH siRNA(0.03 nM 至 10 nM,参见上图)或阴性对照 siRNA 和 2 µL siPORT™ NeoFX™ 转染试剂制备转染复合物。转染后 48 小时,收获细胞并通过实时 RT-PCR 分析 GAPDH mRNA 和 18S rRNA 水平。使用 18S rRNA 作为内部对照,显示了相对于阴性对照 siRNA 转染细胞的剩余 GAPDH mRNA。