- 包括 7 种阴性对照 siRNA 的便利检测组合
- 可简化寻找适用于某一特定筛选的最佳阴性对照的过程
- 在功能方面证明对细胞增殖和活力的影响极小
- 经验证可用于人、小鼠和大鼠细胞
- 还包括具有明确细胞毒性表型的阳性对照 siRNA,用于评估 siRNA 递送效率
与使用单独 siRNA 的实验一致,在这些筛选实验中有效的阴性和阳性对照 siRNA 对于确定转染效率并控制 siRNA 递送的一般影响至关重要。阴性对照 siRNA 对于设置确定 siRNA 在某一特定检测中被视为具有阳性、阴性还是中性影响的“命中”阈值也至关重要。由于阴性对照 siRNA 的重要性以及在某种程度上其中一些可能在某一特定检测中有意外的影响这一事实,大多数研究人员应首先仔细检测阴性对照 siRNA,然后再选择将其中哪些包括在其筛选实验中。
Ambion 现可提供 Silencer siRNA 筛选对照品组合,这是一组包括 7 种独特的阴性对照 siRNA 的组合,RNAi 干扰研究人员用其可确定最适合其细胞系统的阴性对照。这些 siRNA 与所有已知人、小鼠和大鼠基因的核苷酸序列均无相似性。在基于细胞的筛选中对这些 siRNA 进行了检测,经证实其对细胞增殖、细胞活力或细胞形态无显著影响,从而突出显示了其作为阴性对照的有用性。转染这些对照品对细胞数量的影响的示例见图 1A。
AM4611,AM4613,AM4615,AM4639,AM4641,AM4642
图 1. 使用
Silencer 筛选对照 siRNA 进行转染后对相对细胞数量的影响。使用 siPORT™ NeoFX™ 转染试剂采用 30 nM siRNA [Silencer 阴性对照 siRNA (A) 和
Silencer Kif11 siRNA (B)] 对 UMR106 (A) 和 HeLa (B) 细胞进行反向转染,一式三份。转染后 3 天,收获细胞,然后使用二乙酸荧光素底物在荧光板读数仪中测量各样本中的相对细胞数量。
作为额外益处,包括了人、小鼠和大鼠 Kif11 (Eg5) 的阳性对照 siRNA。敲低 Kif11(编码驱动蛋白家族动力蛋白)导致有丝分裂停滞(图 1B)。因此,能够轻松地目视评估 Kif11 siRNA 的有效递送;也可通过几种基于细胞的检测进行测量。
Silencer siRNA 筛选对照品组合中七种阴性对照 siRNA 中的每一种以及 Kif11 siRNA 都以 1 nmol 规格的干粉形式提供。每种对照 siRNA 也可以 5 nmol 规格单独提供,并且可定制包装从而可提供含量更高的规格。