新款 Silencer siRNA 入门试剂盒是刚开始从事 RNAi 实验的研究人员的理想选择。该试剂盒可提供有助于您开始 siRNA 转染实验所需的所有试剂、方案和说明并确保基因敲低实验成功。

Silencer siRNA 入门试剂盒包括高质量、脂质体转染试剂 siPORT™ NeoFX™，其可将 siRNA 高效递送至多种细胞系。siPORT NeoFX 可与反向转染配合使用，这是一种简化方案，可使 RNAi 实验程序节省一整天的时间；还可与标准转染方案配合使用。本试剂对血清不敏感，可高效转染低浓度 siRNA。

其中包括用于 siRNA 递送优化以及敲低情况评估的阳性和阴性对照 siRNA。已证明阳性对照品（一种充分表征的 GAPDH siRNA）可强效下调人、小鼠和大鼠细胞中的 GADPH（图 1）。

图 1.使用 Silencer siRNA 入门试剂盒在人肺癌 (A549)、大鼠骨肉瘤 (UMR106) 和小鼠成纤维细胞 (3T3) 细胞中实现 GAPDH 表达沉默。采用 siPORT™ NeoFX™ 转染试剂转染每种细胞系。(A) 使用 KDalert ™ GAPDH 检测试剂盒测量三种哺乳动物细胞系中 siRNA 介导的 GAPDH 表达沉默。使用试剂盒中提供的推荐方案，将 Silencer GAPDH 或阴性对照 #1 siRNA 反向转染至 96 孔板（4,000 个细胞/孔）中的细胞中，一式两份。在转染后两天收获细胞，并使用随试剂盒提供的 KDalert GAPDH 酶检测试剂测定每份样本中的 GAPDH 酶活性量。与使用阴性对照 #1 转染的培养物相比，在来自使用 GAPDH siRNA 转染的培养物的样本中观察到 GAPDH 水平降低。(B) 在 96 孔板中转染的 A549 培养物中检测到特异性 GAPDH mRNA 敲低，通过实时 qRT-PCR 分析检测到 GAPDH siRNA。与来自使用 Silencer 阴性对照 #1 siRNA 转染的培养物的样本相比，在来自使用 GAPDH siRNA 转染的培养物的样本中检测到 GAPDH mRNA 的 Ct 较高。插图显示，与阴性对照转染细胞相比，使用 GAPDH siRNA 转染的培养物的 GAPDH mRNA 水平相对降低。(C) 对 siRNA 转染的 A549 细胞中 GAPDH 蛋白表达的特异性减少进行 Western 印迹分析。在每个孔中上样 5 µg 总蛋白。在 Silencer 阴性对照 #1 和 GAPDH siRNA 转染样本中，使用试剂盒中提供的抗体检测到特异性 36 kDa 免疫反应活性条带。使用 GAPDH siRNA 转染的细胞显示，GAPDH 蛋白表达水平低于使用 Silencer 阴性对照 #1 siRNA 处理的细胞中的相应值。


提供了抗 GAPDH 抗体，以通过 Western 印迹或免疫荧光评估 GAPDH 敲低。Ambion 的 KDalert™ GAPDH 检测试剂盒还可用于快速评估 GAPDH 酶活性（参见“使用同一检测试剂盒快速评估 siRNA 递送和细胞活力”）。该检测试剂盒的另一个益处是可通过该产品来评估细胞活力。最后，包括 RT-PCR 引物，用于使用 SYBR Green 对 GAPDH mRNA 进行实时定量 RT-PCR 检测。

这一完整的试剂组合使得能够进行和优化 siRNA 转染实验。这些试剂也可用于转染 miRNA，如 Ambion 的 Pre-miR™ miRNA 前体分子。如有必要，可重新订购独立组分。