新款 Silencer™ siRNA 构建试剂盒（正在申请专利）能够节省您的时间和资金，因此您现在能够扩大规模进行大型 siRNA 筛选实验。该试剂盒可以对更多基因或相同基因的更多区域进行筛选，而成本仅是化学合成 siRNA 的几分之一。

RNA 干扰 (RNAi) 是一种用于下调活细胞中特定基因表达的强大技术。在哺乳动物细胞中，可以通过转染小干扰 RNA (siRNA) 来诱导 RNAi，siRNA 包含长度约 21 nt 的双链 RNA 分子，并带有 2 nt 的 3'突出端。为了找到强效的 siRNA，通常会针对每个基因设计 3­5 个 siRNA。这意味着需合成和纯化 6­10 个 RNA 寡核苷酸。Silencer™ siRNA 构建试剂盒可生成转染即用型 siRNA，成本仅为化学合成的几分之一。使用 Silencer™ siRNA 构建试剂盒能够节省成本和时间，帮助您筛选更多的基因以及基因内更多的潜在靶标，从而找到强效 siRNA。高效 siRNA 能够在实验中实现更佳的信噪比和更少的非特异性效应。

试剂盒的工作原理

开始构建 siRNA 时需获得两种便宜的脱盐 DNA 寡核苷酸。如图 1 所示，这些寡核苷酸包含 8 碱基序列，与 Silencer™ siRNA 构建试剂盒中 T7 启动子引物的 3' 末端互补。退火时，每个基因特异性寡核苷酸与提供的 T7 启动子引物结合。使用 Klenow 片段进行的补平反应生成双链模板，可直接用于体外转录反应。两个转录反应产物相互杂交，用 DNase（去除模板）和 RNase（补齐双链 RNA 的末端）处理，并用柱纯化。整个程序可在不到 24 小时内完成，并可轻松扩展 - 合成 15 个 siRNA 分子可以像合成单个 siRNA 一样简单。每次转录/纯化可产生足够的 siRNA，可用于数百次转染。使用 Silencer™ siRNA 构建试剂盒进行双链 RNA 合成和纯化所需的时间是通过亚磷酰胺化学合成 RNA 寡核苷酸和后续纯化通常所需 1­2 周处理时间的几分之一。




图 1.Silencer™ siRNA 构建试剂盒程序。


返回顶部

内容物

该试剂盒包含生成 15 个可直接用于转染的纯化双链 siRNA 所需的所有试剂。其中还包含详细的说明手册和 GAPDH 对照模板。对照模板可用于验证试剂盒的功能，对照反应中制备的 GAPDH 特异性 siRNA 可用于优化转染方案。